3 概述
AST有2種同工酶,即存在於肝細胞質的s-AST和肝細胞線粒體內的m-AsT。s-AST易釋放入血,m-AST與細胞亞結構緊密結合而難釋入血,所以血清中s-AST佔60%~80%。輕、中度肝細胞損害時,僅從肝細胞質中釋出可溶性酶;如果肝細胞損害嚴重乃至壞死時,則線粒體中的酶也釋放。ALT也有s-ALT和m-ALT兩種同工酶,存在於肝細胞質中的s-ALT佔總活力80%~90%,m-ALT量較低。所以,將m-AST作爲肝臟嚴重損傷和肝細胞壞死的指標。
5 血清穀草轉氨酶同工酶的醫學檢查
5.1 檢查名稱
5.2 分類
5.3 取材
5.4 血清穀草轉氨酶同工酶的測定原理
(1)比色法:AST催化基質中的L-天門冬氨酸和α-酮戊二酸,生成穀氨酸和草酰乙酸,後者脫羧生成丙酮酸,再與NDPH作用生成苯腙,在鹼性條件下顯棕色。
(2)連續監測法:AST催化的反應生成草酰乙酸,在過量的指示酶蘋果酸脫氫酶(MDH)作用下,生成蘋果酸,同時使NADH氧化成NAD+,在340nm波長處測NADH氧化速度,其吸光度下降的程度與AST活力成正比。
5.5 試劑
(1)比色法:
①基質液:稱取DL-門冬氨酸2.66g和α-酮戊二酸29.2mg,加1mol/L NaOH 20.5ml溶解,校正pH至7.4,移入100ml容量瓶內,加0.1mol/L磷酸鹽緩衝液(pH 7.4)至100ml,加90mg麝香草酚,冰箱保存。
②其他試劑:同ALT比色法。
(2)連續監測法:
①試劑成分和濃度(IFCC):80mmol/L Tris緩衝液(pH7.8),240mmol/L L-門冬氨酸,12mmol/L α-酮戊二酸,0.18mmol/L NADH,0.1mmol/L磷酸吡哆醛,1600U/L蘋果酸脫氫酶,2500U/L乳酸脫氫酶。
5.6 操作方法
(1)比色法:同ALT比色測定法,僅把酶促反應時間改爲60min,查AST標準曲線。
(2)連續監測法:要根據本實驗室儀器型號介紹確定分析條件。主要參數:同ALT連續監測法。
5.7 正常值
m-AST:2.8~6.2U/L(抑制法37℃);
m-AST佔AST的9.0%~16.5%(電泳法)。
5.8 化驗結果臨牀意義
升高:病毒性肝炎、慢性肝炎、肝硬化活動期、心肌梗死、心肌病。