3 概述
IL-8是一種低分子量(6~8kD)的多肽,單核細胞、淋巴細胞、纖維母細胞、內皮細胞等多種細胞受LPS、TNF或IL-1刺激後都可產生這種細胞因子。IL-8的特徵性生物效應是趨化和激活中性粒細胞,因而參與中性粒細胞介導的組織損傷。在許多慢性炎症性疾病,如類風溼性關節炎、銀屑病等,病變局部或血清IL-8產生異常,定量檢測IL-8對於研究這些疾病的發生、發展及指導治療均有重要意義。
4 血清白細胞介素8的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 取材
4.4 血清白細胞介素8的測定原理
鑑於生物學檢測的侷限性,近年來發展了ELISA和放射免疫法檢測IL-8含量。目前國外已有商品化的ELISA試劑盒或特異的IL-8多抗和單抗。國內北醫免疫教研室等也成功地製備了基因重組IL-8,爲製備IL-8多抗或單抗創造了條件。下面介紹Deforge等(1991)建立的ELISA測定法。
4.5 試劑
(1)兔抗IL-8IgG。
(2)生物素化的兔抗IL-8IgG。
(3)親和素-HRP。
(4)rIL-8標準品。
4.6 操作方法
(1)包被兔抗人IL-8IgG(1μg/ml),以碳酸鹽緩衝液稀釋,加入酶標板各孔中,50μl/孔。4℃過夜。
(2)封閉 用洗液(PBS-0.05% Tween20)洗板3次,加入封閉液(含2%牛血清白蛋白的PBS)200μl/孔,37℃2h。
(3)加樣 加入待檢樣品和系列稀釋的rIL-8標準品,50μl/孔,所有樣品及各稀釋度標準品均爲復孔或三孔,37℃1h。
(4)洗板3次,加入生物素化兔抗IL-8IgG(35μg/ml)50μl/孔,37℃溫育30min。
(5)洗板3次,加入1∶5000稀釋的親和素-HRP,100μl/孔,37℃溫育30min。
(6)洗板3次,加入底物液100μl/孔,室溫顯色5min,每孔加入50μl 2mol/L H2SO4終止反應。
(7)用酶標儀測A490nm。
4.7 正常值
ELISA:8.1~21.3μg/L。
4.8 化驗結果臨牀意義
4.9 附註
該法特異性強,敏感度高。最小檢出量約爲100pg/ml,重複性好。其關鍵在於製備高效價,高純度的兔抗IL-8 IgG。