血紅蛋白測定

1 拼音

xuè hóng dàn bái cè dìng

2 方法

氰化高鐵血紅蛋白( HiCN)法^[1]。

3 原理

血紅蛋白(Hb)中的亞鐵離子(Fe²⁺)被高鐵氰化鉀氧化成高鐵離子(Fe³⁺)，血紅蛋白轉化成高鐵血紅蛋白。高鐵血紅蛋白與氰離子(CN^-)結合，生成穩定的氰化高鐵血紅蛋白，在540 nm波長處有一個較寬的吸收峯，在該波長處測得的吸光度(A)與溶液中濃度成正比。以測得的樣品吸光度值與氰化高鐵血紅蛋白標準液吸光度值比較，得出樣品血紅蛋白含量。^[1]

4 器材

^[1]

75%酒精，酒精棉球，消毒的幹棉球，一次性無菌採血針，經標定合格的一次性微量血紅蛋白吸管，一次性10 mL塑料試管，可見光分光光度比色計，光徑1.0 cm比色杯。

採血針與微量血紅蛋白吸管應一人一換，不得重複使用。醫療廢物應按照衛生部頒佈的《醫療衛生機構醫療廢物管理辦法》進行處理。

5 試劑

^[1]

a) 四種濃度的氰化高鐵血紅蛋白標準液：50 g/L、100 g/L、150 g/L、200 g/L。

b) 市售氰化高鐵血紅蛋白試劑，用蒸餾水按比例要求稀釋，貯存於棕色玻璃瓶中備用。

或配製氰化高鐵血紅蛋白試劑（HiCN試劑）：

氰化鉀(KCN)    0.050 g

高鐵氰化鉀[K₃Fe(CN)₆]    0.200 g

無水磷酸二氫鉀(KH2PO4)    0.140 g

非離子表面活性劑(Triton X-100，Saponic218等)  1.0 mL

上述成分分別溶於蒸餾水中，混合，置1L容量瓶內，再加蒸餾水至1000 mL混勻，儲存於棕色玻璃瓶中，置4℃～10℃保存不超過1個月。試劑應爲淡黃色透明溶液，pH值在7.0～7.4。若試劑出現混濁則不能使用。本試劑不吸收480nm以上的光波，因此讀數與蒸餾水空白一致。

6 操作步驟

^[1]

a) 血紅蛋白測定儀器的校正：以HiCN試劑調零，以50 g/L、100 g/L、150 g/L、200 g/L四種濃度的氰化高鐵血紅蛋白標準液校正儀器，分別測定在540 nm波長的吸光度。在標準儀器條件下，波長540 nm各濃度吸光度值恆定。若四種濃度標準液吸光度讀數誤差在允許範圍內（表3），血紅蛋白含量與吸光度符合式(1)：

Hb (g/L) =A×K-A×367.7  …………………………(1)

式中： Hb-血紅蛋白值，單位爲克每升(g／L)；A-吸光度； K-常數，爲367.7。

氰化高鐵血紅蛋白標準液吸光度讀數若超出表3誤差範圍，式(1)中的K需要按式(2)校正：

K_校正=（∑吸光度真值／∑吸光度讀數）×367.7

=（1.360/∑吸光度讀數）×367.7    ………．(2)

b) 於10 mL試管中加入5 mL HiCN試劑。

c) 用酒精消毒左手無名指，待幹後用一次性無菌採血針向指尖垂直方向穿刺，深約2 mm～3 mm。用一次性微量血紅蛋白吸管吸取20 μL血樣，管內不得有氣泡，擦去管外血液。

d) 置吸管於HiCN試劑中，使管尖在液麪下，輕輕自管中推出血液，反復吸取HiCN試劑（3次以上），將管內血液洗淨，混勻，靜置10 min以上。

e) 於540 nm波長處，以HiCN試劑爲空白，測定樣品吸光度。f)計算結果

樣品血紅蛋白值(g/L)=樣品吸光度值×367.7（或K_校正）…………………(3)

7 結果判斷

遵照附錄B的規定作出是否貧血的診斷。^[1]

8 結果記錄

記錄血紅蛋白測定值與貧血診斷結果。^[1]

9 注意事項

^[1]

a) 氰化鉀是劇毒品，配置試劑與比色後應嚴格按劇毒品管理程序操作。

b) 用其他方法測定血紅蛋白，應溯源至HiCN的結果。

10 參考資料

1. ^ [1] GB/T 26343—2010, 學生健康檢查技術規範[S]．