3 概述
前列腺特異性酸性磷酸酶是酸性磷酸酶同工酶,由前列腺上皮細胞溶酶體產生,是一種由兩個相同亞單位組成的糖蛋白,其分子量爲100kD,等電點4.4~5.5,半衰期爲1.1~2.6小時。男性血清中酸性磷酸酶主要來源於前列腺,而前列腺組織中酸性磷酸酶活力較其他組織高1000倍。
4 前列腺特異性酸性磷酸酶的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 取材
4.4 前列腺特異性酸性磷酸酶的測定原理
前列腺酸性磷酸酶放射免疫分析利用前列腺酸性磷酸酶具有多個抗原決定簇,選用三個針對不同決定簇的單克隆抗體(一個用125I標誌作爲示蹤,另兩個是配體標記物用於提高靈敏度、特異性及分離複合物目的),在配體包被的聚乙烯反應管內,標準品/待測樣品的前列腺酸性磷酸酶與單克隆抗體形成複合物,然後加入抗配體抗體使前列腺酸性磷酸酶與單克隆抗體複合物與固相支持物上配體連結,達到分離遊離單克隆抗體的目的,測定反應管的放射性計數,即可推算前列腺酸性磷酸酶含量。本法使用固相支持物及分離劑可在多種類似方法中使用[如前列腺特異抗原(PSA)測定]爲通用試劑,便於大規模生產及方法學的穩定。
4.5 試劑
本方法採用IRMA-Count前列腺酸性磷酸酶試劑盒,組成如下:
(1)125I-PAP單克隆抗體:凍幹品2瓶,內含125I標記的抗前列腺酸性磷酸酶單克隆抗體及配體標記的抗前列腺酸性磷酸酶單克隆抗體、防腐劑。使用前每瓶加入水11ml復原,放置10min後,充分混勻,呈黃色液體後使用,復原後2~8℃冰箱可保存30天(或至試劑瓶標明的失效期),每瓶放射性不超過275kBq。
(2)配體包被的聚乙烯管:100支,用錫紙袋密封包裝。在冰箱內密封乾燥可保存1年。
(3)抗配體抗體:1瓶(2.8ml)含防腐劑的藍色液體。啓封后在2~8℃冰箱內可保存30天。可直接用於實驗。
(4)前列腺酸性磷酸酶標準品:7瓶(A~G)凍幹標準品,內含人血清,緩沖劑及慶大黴黴素。使用前用水復原。A瓶加入5ml、B~G瓶分別加入2.0ml,放置至少30min,並充分溶解混勻方可使用,其前列腺酸性磷酸酶含量分別爲0、1、2.5、5、15、75、150μg/L。復原後在2~8℃可保存30天,但應避免反覆凍融。
(5)濃緩沖洗液:1瓶(40ml)內含緩沖劑,表面活性劑。使用前用水400ml稀釋(最終體積440ml)後在2~8℃可保存6月。
4.6 操作方法
首先將包被的聚乙烯管依次編號,T管(1,2)用未經包被的聚乙烯管(12×75mm)代替,然後嚴格按操作程序(表1)操作。
4.7 正常值
0~2.1μg/L。
4.8 化驗結果臨牀意義
(1)前列腺癌患者血清PAP水平明顯增高,且PAP水平隨前列腺癌病情進展而升高,有轉移者較未轉移者升高更爲明顯。提示血清PAP檢測對前列腺癌的分期及預後判斷具有一定的臨牀意義。
(2)血清PAP水平升高還可見於其他惡性腫瘤如骨肉瘤、多發性骨髓瘤以及其他癌的骨轉移等。
(3)在某些非腫瘤性疾病如前列腺增生、甲狀旁腺功能亢進症、骨質疏鬆等亦可出現血清PAP水平升高,但測定值較低。
4.9 附註
(1)本測定方法測定範圍爲1~150μg/L,最小可測值爲0.03μg/L,MB/T爲32%,NSB爲0.05%。
(3)高濃度前列腺酸性磷酸酶標本可用A液(前列腺酸性磷酸酶爲零的標準血清)作適當倍數稀釋。
(4)反應結束後用稀緩沖洗液洗反應管的過程與實驗靈敏度、重複性有關,同時應嚴格將洗液吸乾。