3 概述
寄生於人體的瘧原蟲有4種,即間日瘧、惡性瘧、三日虐和卵形瘧。瘧原蟲抗體檢測,間接免疫熒光法是目前應用最廣泛的方法。瘧原蟲抗原檢測需用紅細胞溶解物來測定。其中,放射免疫法主要用於惡性瘧的診斷。酶聯免疫吸附測定不能區分間日瘧和惡性瘧,只能在單純間日瘧或惡性瘧流行區使用。通過瘧原蟲抗體、抗原測定,提高了對虐疾的檢測率。人體感染瘧原蟲後,發生原蟲血癥後1周就可檢出免疫抗體,且在短期內達高峯。抗體效價的高低與個體的免疫應答、有無重複感染、治療是否徹底等有關。抗體檢測的主要價值在於瘧疾的流行病學調查(包括流行水平、監測傳播強度、確定範圍、考覈治療效果等)。臨牀上對多次寒冷發作而未查明病因者,瘧原蟲抗體的檢測將有助於診斷。
4 瘧原蟲抗原和抗體的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 取材
4.4 瘧原蟲抗原和抗體的測定原理
間接免疫熒光法:受檢血清中的抗瘧原蟲抗體與血片上的瘧原蟲抗原相結合,繼加熒光標記的抗人IgG抗體,使與血片上的人IgG作用,而在抗原部位顯現熒光。
4.5 試劑
(1)抗原血片:採用食蟹猴瘧原蟲薄血膜片和惡性瘧原蟲薄血膜片。專業研究機構可供應。保存於4℃或低溫冰箱中備用。
(2)熒光標記抗人IgG,國內有商品供應。
4.6 操作方法
(1)按常規方法採集血清或用口徑1.2cm的玻(鐵)管的管口在濾紙上壓出圓形印跡。從受檢者耳或手指取血並加滿圓圈,其血量約爲20μl(約相當血清10μl),編號後陰幹,放入有乾燥劑的密封塑料袋內,運送至實驗室,4℃可保存半年,-20℃可保存2年。檢測時將幹血滴剪下後放入反應板凹孔中,加0.01mol/L磷酸鹽緩衝液0.2ml(pH值7.2),4℃浸泡過夜即成相當於1∶20的血清稀釋液。
(2)從冰箱中取出抗原血片,立即用電風扇吹乾,用特種蠟筆將每張抗原片劃分成若干小格,每小格試1個標本或1個滴度,每格加血清1滴。每批試驗均需設陰、陽性參考血清和PBS空白對照。加血清後立即移入溼盒,37℃溫育30min後,用0.01mol/L PBS(pH值7.2)緩慢沖洗後放入有PBS的缸內浸泡5~10min。
(3)逐格滴加用0.01mol/L PBS(pH值7.2)稀釋成1∶10的抗人IgG熒光抗體,置溼盒內37℃ 30min,同法洗滌後,每小格中加甘油和PBS等量混合液或蒸餾水,覆以蓋片,於熒光顯微鏡下鏡檢反應結果。
(4)結果判讀:以裂殖體和大滋養體胞漿的熒光強度和結構清晰程度區分,無熒光爲(-),熒光微弱、形態結構不清爲(±),熒光較弱、形態結構尚清楚爲(+),另外根據熒光明亮度和結構清晰度的增加依次分爲(++)~(++++)。
4.7 正常值
陰性。
4.8 化驗結果臨牀意義
陽性:見於各型瘧疾。對惡性瘧疾患者抗體新途徑價爲1∶80或更高,可認爲是帶蟲者或近期感染瘧疾的標誌。
4.9 附註
由於抗體產生於瘧原蟲血癥之後,因而臨牀查瘧原蟲抗體對初發病人無早期診斷價值。