腦脊液膠體金試驗

1 拼音

nǎo jǐ yè jiāo tǐ jīn shì yàn

2 英文參考

cerebrospinal fluid colloidal gold test

3 概述

膠體金試驗法，是檢驗中一種特殊檢查方法，用於臨牀診斷和鑑別診斷。

4 檢查名稱

腦脊液膠體金試驗

5 分類

體液和排泄物檢查 > 腦脊液檢查

6 化驗取材

腦脊液

7 腦脊液膠體金試驗的原理

腦脊液中抗核抗體與抗原片上抗原結合後，再以金標記SPA與抗原片上與抗原結合的抗核抗體IgG Fc部分結合。金標記SPA作爲一種催化劑，經對苯二酚等還原劑作用，將銀染色液中銀離子還原成不溶性金屬銀沉澱在每個金顆粒的周圍。銀沉澱在光鏡下清楚可見核區有棕黑色顆粒。

8 試劑

（1）pH7.4 0.02mol/L Tris-NaCl緩衝液（TBS）稱取Tris 2.42g NaCl 8.75g，牛血清白蛋白（BSA）1.0g、NaN₃0.5g溶於雙蒸水後，再加雙蒸水至1000ml。用濃HCl調pH至7.4，再加Tween20和TritonX-100各0.1ml，混勻。

（2）銀染色液：分別取20.0g/L明膠6ml，pH3.5檸檬酸緩衝液（檸檬酸5.1g，檸檬酸鈉4.7g加蒸餾水至20ml）1ml，57.0g/L對苯二酚溶液3ml與25.0g/L硝酸銀溶液0.2ml，於用前依次混勻。

（3）膠體金溶液：將氯金酸（HAuCl4）用抗壞血酸、鞣酸或檸檬酸鈉等還原法制成一定直徑的金溶膠顆粒（膠體金）。取10.0g/L氯金酸水溶液1ml加於雙蒸水99ml中，煮沸後迅速加入2.45ml檸檬酸鈉-鞣酸溶液（10.0g/L、檸檬酸鈉2.0ml、10.0g/L鞣酸0.45ml）再煮5min，室溫冷卻後，補足雙蒸水至1000ml，即成直徑5nm的紫紅色的膠體金溶液。

（4）金標記SPA（SPA-G）：膠體金標記SPA或抗體等可用於免疫轉印技術與免疫組織化學定位。

①確定SPA最適用量：取10支試管各加入1ml膠體金溶液和0.1ml各稀釋度的SPA（1.0g/L SPA系列稀釋）混勻後放置5min。各管再加0.1ml 100.0g/L NaCl溶液，置室溫2h後肉眼觀察，使1ml膠體金保持穩定的紫紅色不變的最小SPA量即爲SPA最適用量（如80mg/L）。實際標記時SPA用量應再增加10%～20%。

②標記：取膠體金100ml調pH6.0，攪拌下加入SPA1.0mg，5min後加BSA使達10.0g/L濃度。裝透析袋中埋入變色硅膠中濃縮，經SephadexG-200柱（1.2cm×30cm）層析，用TBS洗脫，收集清澈透明的深紅色組分，加等量中性甘油混合後分裝，4℃存貯。

9 操作方法

（1）抗原片製備用鼠肝勻漿制抗原片。

（2）免疫金銀染色。

①將待測標本用TBS作1∶10稀釋，均勻滴加幹抗原片上放37℃溼室中30min。

②流水沖洗後再用TBS浸洗5min共3次。

③用16.0g/L BSA封閉15min後，傾去BSA用濾紙吸乾。

④均勻滴加最適工作濃度（用方陣法滴定）的SPA-G，於37℃溼室中反應30min後，再重複②③步驟。

⑤均勻滴加銀染色液，於室溫避光10min，流水沖洗後，晾乾，以高倍鏡或油鏡檢查。

10 正常值

0001111000（符號代表；0爲玫瑰紅色與對照管相同、1爲紅帶藍色、2爲淡紫色或紫色、3爲藍色、4爲微藍色、5爲無色）。

11 化驗結果臨牀意義

（1）梅毒型：0123320000或0134321000，見於各種類型的腦梅毒、多發性硬化。

（2）麻痹性：5555542100或5554321000，見於麻痹性癡性癡呆、脊髓癆、多發性硬化。

（3）腦膜炎型：0001224531或0011232210，見於各種球菌性腦膜炎、結核性腦膜炎。

12 附註

（1）此法具有分辨力高，定位精確的優點。

（2）所用玻璃器皿應潔淨，所用蒸餾水必須雙蒸或三蒸。

（3）配製膠體金溶液時，調整各試劑的比例可獲直徑不同的金顆粒。

直徑＞10nm的金粒子不易穿透組織，故作細胞內抗原定位時，以配製直徑5nm的金溶膠爲宜。

（4）硝酸銀、對苯二酚溶液應避光保存並臨用時現配。

（5）被檢血清中有其他自身抗體，如抗平滑肌抗體，抗心肌抗體、抗線粒體抗體等其抗原片應根據專門試驗的要求製備。

13 相關疾病

梅毒、多發性硬化、麻痹性癡呆、癡呆、結核性腦膜炎