4 腦脊液膽固醇酯的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 化驗取材
4.4 腦脊液膽固醇酯的測定原理
待測標本中的膽固醇酯(CE)被膽固醇酯水解酶(CEH)水解成遊離膽固醇(Chol),後者被膽固醇氧化酶(CHOD)氧化成△4-膽甾烯酮併產生過氧化化氫,再經過氧化物酶(POD)催化4-氨基安替比林與酚(三者合稱PAP),生成紅色醌亞胺色素(Trinder反應)。醌亞胺的最大吸收在500nm左右,吸光度與標本中TC含量成正比。反應式如下:
4.5 試劑
(1)酶試劑:組成因不同商品試劑盒而異,酶用量也因酶製品質量而定。一般爲乾粉或凍幹品,臨用前用緩衝液配製成單一試劑:
假單胞菌CEH ≥800U/L
奴卡菌CHOD ≥400U/L
辣根POD ≥1000U/L
膽酸鈉 3mmol/L
酚 3.5mmol/L
緩衝液用於復溶其他試劑。酶與顯色劑可以分裝爲兩管或爲單一的,其劑型可以爲水溶液,凍幹品或乾粉。
磷酸鹽緩衝液可用Tris緩衝液替代,後者濃度100mmol/L,pH7.7。爲提高顯色靈敏度。酚可以用其衍生物或其他色原代替。
(2)Chol標準參考血清:本法TC測定中以準確定值的參考血清爲標準,參考血清的Chol濃度最好有高、中、低3種,中濃度血清的Chol含量應在3.8~
5.2mmol/L。
(3)試劑與參考血清的穩定性:未開瓶的試劑4℃存放至少穩定1年。復溶後的酶試劑在2~8℃至少穩定1周,15~25℃3天,如在此期內出現肉眼可辨的粉紅色爲不合格。標籤上註明出品日期及有效期。
液態的Chol參考血清(含有不抑制CHE、CHOD與POD的防腐劑),-20℃保存至少穩定2年,凍幹品更穩定。標籤上註明出品日期及有效期。
4.6 操作方法
使用酶分析操作法。
4.7 正常值
0.0435±0.0077mmol/L。
4.8 化驗結果臨牀意義
腦血管病患者並有高血壓腦脊液膽固醇酯與遊離膽固醇顯著升高,其中膽固醇酯與遊離膽固醇的參考值分別爲0.0435±0.0077mmol/L和0.092±0.018mmol/L,並且以前者升高突出;腦動脈硬化患者也明顯增高,但以遊離膽固醇升高爲主,故此兩項的檢測具有鑑別診斷的意義。
4.9 附註
(1)現在臨牀上已很少採用遊離Chol測定,如須測定遊離Chol,最簡便的也是用酶法,即在上述TC測定用酶試劑中省去CEH即可,一般遊離Chol約佔TC的30%左右。