2 概述
頂體酶存在於精子頂體內膜及赤道部膜上,通常以無活性形式存在,當精子頭部進入卵透明帶時,頂體酶原才被激活爲頂體酶。此酶是受精過程中不可缺少的一種中性蛋白水解酶,其作用類似於胰蛋白酶,它能水解卵透明帶糖蛋白,使精子穿過卵丘再穿過透明帶,使精子與卵子融合;它還能促使生殖道中激肽釋放,從而增強精子的活力和促進精子的運動。
3 精子頂體酶的醫學檢查
3.1 檢查名稱
3.2 分類
3.3 精子頂體酶的測定原理
在25℃ pH8.7條件下,採用ADH/NAD+反應測定苯甲酰精氨酸乙酯(BAEE)的水解產物乙醇,乙醇又在乙醇脫氫酶(ADH)的催化作用下,將輔酶Ⅰ(NAD)還原爲還原性輔酶Ⅰ(NADH),根據NADH吸光度的變化值而得出頂體酶的水解活性。
3.4 試劑
(1)乙醇脫氫酶(ADH)(Sigma產品)比活力340u/mg。
均在臨用時以pH8.7 0.05mol/L Tris-HCl緩衝液配製,濃度分別爲3.46mg/ml、1mg/ml、1mg/ml。
3.5 操作方法
(1)精子的洗滌和頂體酶的提取:取0.25ml液化的精液於塑料離心管中,以500×g離心5min;棄上清,將離心管在吸水紙上倒置,以除去剩餘溶液,再加0.25ml 2%的醋酸溶液,放4℃冰箱內抽提過夜(16~24h),取出後以1000×g離心10min,取上清備用。
(2)測定過程:在比色杯內依次加入用pH8.7 0.05mol/L Tris-HCl緩衝液新鮮配製的NAD(1mg/ml)0.1ml,BAEE1mg/ml 0.5ml,ADH(3.46mg/ml)0.1ml和Tris-HCl緩衝液2.25ml,均勻混合後25℃下預溫5min,再加入0.05ml頂體酶抽提液立即混合均勻,記錄加入酶液後10min,反應液在366nm下吸光度的變化值(△A366mm/10min)。
(3)酶活力單位的定義和酶活力的計算:1個毫單位(mu)的頂體酶活力等於在上述反應條件下(pH8.5和25℃),每分鐘水解1nmol/L的BAEE所需要的頂體酶量。因爲水解1nmol/L的BAEE使反應液的吸光度變化0.0011,所以每毫升精液內的酶活力按下列公式計算:
t是反應時間(10min),△A是在t分鐘內吸光度的變化值,V是加入酶液的體積(0.05ml),所以,酶活力
按以上公式得到的是每毫升抽提液內的酶活力,因爲抽提液的體積和原始精液體積相同,所以,上述公式計算的就是每毫升精液內的頂體酶活力。
3.6 正常值
(36.72±21.43)U/L(BAEE-ADH法)。
3.7 化驗結果臨牀意義
頂體酶對於精子的運動和受精過程都是不可缺少的,頂體酶活力不足可導致男性不育。因此精子頂體酶活性測定可作爲精子受精能力和診斷男性不育症的參考指標。
3.8 附註
頂體酶還能促進生殖系統中激肽的釋放,從而增強精子的活力和促進精子的運動。頂體酶活力不足可導致男性不育。