4 紅細胞丙酮酸激酶的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 紅細胞丙酮酸激酶的測定原理
丙酮酸激酶在ADP存在下能催化磷酸烯醇式丙酮酸（簡稱PEP）產生丙酮酸，再由乳酸脫氫酶（簡稱LDH）將其轉變爲乳酸，同時將NADH變爲NAD。其反應式如下：
4.4 試劑
（1）Tris-HCl 1mol/L：EDTA 5mmol/L DH8.0溶液。取12.1g Tris和168mg EDTA-Na2放在燒杯中，在室溫下，用接近80ml的蒸餾水溶解，用濃鹽酸凋pH至8.2（約用5ml濃HCl）再用2mol/L HCl調節pH至8.0。將混合液移至100ml容量瓶中，加蒸餾水至100ml。
（2）1mol/L：KCl（MW 74.55）稱7.46g KCl溶解至100ml。
（3）0.1mol/L：MgCl2（MW 203.31）稱MgCl22.033g加蒸餾水溶解至100ml。
（4）30mmol/L：ADP（MW 529.2）精稱8mg溶解在0.5ml蒸餾水中。
（5）50mmol/L：PEP（MW 465.3）精稱23.3mg溶在1ml蒸餾水中。
（6）60u/ml：LDH取1880u/ml LDH 330μL用β-疏基乙醇EDTA穩定液稀釋到1ml。
（7）100g/L：EDTA溶液（中性）稱10g EDTA加蒸餾水至100ml，取1mol/L NaOH調節pH到7.0。
（8）NADH：2mmol/L、MW 709.4純度100%精稱1.42mg溶於1ml蒸餾水中（現用現配）。
（9）β-疏基乙醇-EDTA穩定液取5μl：β-疏基乙醇加1ml 10%EDTA，用蒸餾水稀釋至100ml。
（10）溶血液的製備：取3ml肝素抗凝血，放置4℃冰箱使其自然沉降，吸棄血漿、白細胞、血小板部分，用冷生理鹽水洗滌紅細胞3次，離心速度1000r/min，5min，再用冷生理鹽水配成50%紅細胞懸液。
（11）1∶20溶血液：取50%紅細胞懸液0.2ml，加1.8ml β疏基乙醇-EDTA穩定液，此液需測Hb濃度。
4.5 操作方法
見表1。
在波長340nm，37℃下測定15min內吸光度下降的差值，如無恆溫裝置，可先測一個最大A值，孵育反應液37℃15min再測A值兩者相減，計算酶活力，按下式計算：
式中E：每克HB酶活性，國際單位。
Hb：每100ml溶血液中Hb含量，以克表示。
VC：比色杯容積。
△A：在340nm每分鐘的吸光度變化（以測得A值之差除以15min）。
6.22：1mol/L NADH溶液的最佳吸光度。
4.6 正常值
60名正常人測定結果，紅細胞PK正常值15.1±4.99u.g Hb，與國際血液學委員會紅細胞PK15.0±1.99u/g Hb相近，本組35名男性（20～46歲）紅細胞PK＝15.0±4.02u/g Hb，25名女性（20～50歲）爲15.9±4.4u/g Hb，成人男女無顯著差別（P＞0.05）。
4.7 化驗結果臨牀意義
丙酮酸激酶（PK），是紅細胞葡萄糖無氧酵解途徑中三個限速酶之一，直接關係着紅細胞能量代謝，此酶缺乏屬常染色體隱性遺傳，可導致非球形紅細胞溶血性貧溶血性貧血，在人類紅細胞酶缺陷病人中，PK缺乏的發病率僅次於G-6-PD缺乏，屬第二位，它也可繼發於部分的骨髓增生異常綜合徵MDS，白血病及再生障礙性貧血的病人，我們已測定到5例先天性非球形紅細胞溶血性貧溶血性貧血病人（原因不明），1例MDS（後轉爲白血病）1例急性多顆粒早幼粒細胞白血病，1例慢性粒細胞白血病均爲PK活性缺乏。
4.8 附註
（1）因白細胞、血小板、網織紅細胞影響紅細胞PK活性測定，即使在紅細胞PK缺乏亦是如此。此須儘可能從紅細胞懸液中除去。
（2）血液標本需新鮮，若以4℃貯存進行測定，不得超過3天。最好是需帶正常對照。
（3）試劑純度要保證，有的試劑要求新鮮配製，孵育時間、溫度、試劑pH要準確。
（4）我們根據國際血液學標準委員會推薦的方法稍加改良，建立PK定量測定方法。