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質粒DNA的純化
.../ml),然後將DNA貯於-20℃。 (二)氯化銫-溴化乙錠梯度平衡離心法純化閉環DNA 1.連續梯度 1)測量DNA溶液的體積,按lg/ml的用量精確地加入固體CsCl,將溶液加溫至30℃助溶。溫和地混勻溶液直到鹽...
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溴化乙錠EB淨化和處理方法
...的同時,我也把我綜合收集到的資料發給大家看一看。溴化乙錠EB淨化和處理方法EB是我們從事生命科學尤其是分子生物學經常要接觸的致癌性物質,且不好處理.現提供如下方法,供參考.特別是剛走進實驗室未生育的新同行,一定得...
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實驗室有毒物質介紹和防護注意事項
...肌膚。吸收:吸收危險性很低。2.EB:EB(Ethidiumbromide,溴化乙錠)溴化乙錠是一種高度靈敏的熒光染色劑,用於觀察瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中的DNA。溴化乙錠用標準302nm紫外光透射儀激發並放射出橙紅色信號,觀察瓊脂糖凝膠...
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DNA的提取和純化
...加熱裂解時可釋放相對大量的糖類,當隨後用氯化銫-溴化乙錠梯度平衡離心進行質粒純化時它們會惹出麻煩。糖類會在梯度中緊靠超螺旋質粒DNA所佔位置形成一致密的、模糊的區帶。因此很難避免質粒DNA內污染有糖類,而糖類...
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廢棄溴化乙錠EB淨化和處理方法
實驗室中經常有EB被打翻或EB廢棄物的處理問題,如何做到標準處理?1嚴禁隨便丟棄。因爲EB是強致癌性,而且易揮發,揮發至空氣中,危害很大。2廢EB溶液的處理方法(1)對於EB含量大於0.5mg/ml的溶液,可如下處理:a.將EB溶液用水...
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核酸電泳的指示劑與染色劑
...核酸電泳後,需經染色後才能顯現出帶型,最常用的是溴化乙錠染色法,其次是銀染色. 溴化乙錠(ethidiumbromide,EB)是一種熒光染料,EB分子可嵌入核酸雙鏈的鹼基對之間,在紫外線激發下,發出紅色熒光.根據情況可在凝膠電...
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PCR擴增產物的電泳分析
...核酸電泳後,需經染色後才能顯現出帶型,最常用的是溴化乙錠染色法,其 次是銀染色. 溴化乙錠(ethidiumbromide,EB)是一種熒光染料,EB分子可嵌入核酸雙鏈的鹼基對 之間,在紫外線激發下,發出紅色熒光.根據情況可...
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質粒DNA的大量製備
...ey(1981)的方法修訂而成]可與隨後的純化步驟如氯化鈀-溴化乙錠梯度平衡離心等步驟聯合使用。建議該法只用於經氯黴素處理的培養物,未處理的培養裂解後過於粘稠,不利操作。當從大腸桿菌HB101或其衍生質粒(包括TG1...
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枯草桿菌對氨茴環黴素的抗性
... 對ANC強抗性突變株DM104對化學特性不相關的化合物如溴化乙錠和諾丹明產生交叉抗性。鈣通道阻斷劑異搏定使突變株失去對氨茴環黴素的抗性。基因克隆獲得了4個帶有DM104染色體上不同片段的重組質粒,只有1個片段與已知的枯...
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PCR-微孔板反向雜交法檢測HBVDNA
...,擴增產物同時作微孔板反向雜交法和瓊脂糖凝膠電泳溴化乙錠染色法檢測,結果見表1。表1 PCR-微孔板反向雜交法檢測靈敏度血清稀釋倍數病毒拷貝數雜交法 450nm處吸光度溴化乙錠法未稀釋2×1051.454+1012×1041.413+1022×1031.312+1...
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質粒DNA的鹼裂解法提取與純化
...質粒DNA相對較小及共價閉環兩個性質。例如,氯化銫-溴化乙錠梯度平衡離心、離子交換層析、凝膠過濾層析、聚乙二醇分級沉澱等方法,但這些方法相對昂貴或費時。對於小量製備的質粒DNA,經過苯酚、氯仿抽提,RNA酶消化和...
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表達人自身抗原SSA/Ro60重組體的構建及鑑定
...min,共計30個循環;最後在72℃中延伸10min。擴增產物經溴化乙錠-瓊脂糖凝膠電泳檢測。 1.2.5 PCR產物酶切及回收 將PCR產物24μl用BamHI內切酶進行單酶切,37℃2h。加入EcoRI內切酶進行酶切37℃2h。將經2次酶切產物經溴化乙錠-...
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瓊脂糖凝膠電泳
...一般200~400bp的PCR產物50V電壓,電泳20~40min即可. 8.溴化乙錠染色後,紫外儀上觀察電泳帶及其位置,並與核酸分子量標準比較被擴增產物的大小.作者:
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三種染色方式下四種核酸染料的靈敏度比較
...影響及作用機制。使用染膠法、染樣品法及後染法比較溴化乙錠(EB)與3種新型核酸染料GoldViewnaII、GoldView及DNAGreen染色DNA的靈敏度。方法在瓊脂糖凝膠電泳中,分別在3種染色方式下使用4種核酸染料對凝膠中的DNA進行染色,觀察...
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幼兒園兒童鉅細胞病毒分離毒株的限制性酶切譜分析
...〔1〕。 病毒DNA的純化:上述提取的HCMVDNA樣品在含溴化乙錠的0.8%低熔點瓊脂糖凝膠內電泳,長波紫外燈下切取HCMVDNA電泳條帶,參照分子克隆實驗指南迴收凝膠中DNA。 限制性核酸內切酶的應用及消化產物的電泳:取2μgHCMV...
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Southern雜交
...維素濾膜或尼龍膜,濾紙。 3、試劑: (1)10mg/ml溴化乙錠(EB)。 (2)50×Denhardt‘s溶液:5gFicoll-40,5gPVP,5gBSA加水至500ml,過濾除菌後於-20℃儲存。 (3)1×BLOTTO:5g脫脂奶粉,0.02%疊氮鈉,儲於4℃。 (4)預雜交溶液:6×SSC...
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質粒消除現象的研究現狀與意義
...染料包括吖啶黃(Acriflavine)、吖啶橙(Acridineorange,AO)、溴化乙錠(Ethidiumbromide,EB)等可用作質粒消除劑(Curingagent),其作用機理是選擇性地抑制質粒的複製。吖啶橙是嵌入DNA雙鏈中影響質粒複製的色素,據報道[5]其消除率爲50%。Na...
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實驗室常用貯存液的配製參數
...NaOH將溶液的pH值調至接近8.0,才能完全溶解。 14.溴化乙錠(10mg/ml溶液) 【配製方法】在100ml水中加入1g溴化乙錠,磁力攪拌數小時以確保其完全溶解,然後用鋁箔包裹容器或轉移至棕色瓶中,保存於室溫。 【注意...
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實驗室常用貯存液的配製參數
...NaOH將溶液的pH值調至接近8.0,才能完全溶解。 14.溴化乙錠(10mg/ml溶液) 【配製方法】在100ml水中加入1g溴化乙錠,磁力攪拌數小時以確保其完全溶解,然後用鋁箔包裹容器或轉移至棕色瓶中,保存於室溫。 【注意...
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第二節 PCR技術的原理
...見,其擴增的倍數是巨大的,將擴增產物進行電泳,經溴化乙錠染色,在紫外竈照射下(254nm)一般都可見到DNA的特異擴增區帶。作者:
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存活素反義寡核苷酸對甲狀腺癌細胞生長的抑制作用
...胞中存活素mRNA、蛋白表達水平,DNA裂解分析、吖啶橙/溴化乙錠(AO/EB)染色法、流式細胞儀檢測細胞凋亡水平和形態變化,MTT法檢測細胞生長抑制情況。結果轉染ASODN各組細胞存活素mRNA和蛋白表達均較空白對照組、SODN組明顯減弱...
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可注射性骨組織工程載體研究進展
...更多的病例收集和長期追蹤。 4聚氧乙烯類 聚氧化乙烯類是具有良好生物相容性的高分子材料,可溶於水,隨濃度的增大其黏度也相應增大。在溫度改變的條件下固化爲水凝膠。它與蛋白質和大部分生物大分子不發生作...
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容量敏感外向整流性氯通道參與氧化應激介導的系膜細胞凋亡
...胞膜片鉗技術用於檢測VSOR氯電流.細胞凋亡通過吖啶橙/溴化乙錠熒光染色、電子顯微鏡、TUNEL染色和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3活性確定。結果150μmol/LH2O2激活系膜細胞VSOR氯電流,H2O2激活的氯電流具有典型的VSOR氯電流電生...
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PCR-SSCP技術
...丙烯酰胺凝膠電泳;④最後通過放射性自顯影、銀染或溴化乙錠顯色分析結果.若發現單鏈DNA帶遷移率與正常對照的相比發生改變,就可以判定該鏈構象發生改變,進而推斷該DNA片段中有鹼基突變.該方法簡便、快速、靈敏,不需要...
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DNA酶切及凝膠電泳
...法)所無法分離的DNA片段。當用低濃度的熒光嵌入染料溴化乙啶(Ethidiumbromide,EB染色,在紫外光下至少可以檢出1-10ng的DNA條帶,從而可以確定DNA片段在凝膠中的位置。此外,還可以從電泳後的凝膠中回收特定的DNA條帶,用於以後的克隆...
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PCR和RT-PCR技術
...技術。一般,經過20-30個循環得到的擴增產物就足夠在溴化乙錠染色的凝膠上觀察到。反應包括幾個成分(表1)。模板可以爲純化的基因組或質粒DNA;由RNA轉化得到的cDNA;或未經純化的粗製生物樣品,如細菌克隆或噬菌斑。引...
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hNaDC1基因5’側翼區轉錄調控序列系列載體構建與鑑定
...環;最後72℃延伸8min。PCR產物通過1%瓊脂糖凝膠電泳,溴化乙錠染色並照相予以鑑定。1.4pGL3hNaDC1A~E表達載體的構建與鑑定pGL3Basic空白載體和PCR產物均用KpnI、HindIII雙酶切,回收pGL3Basic大片段和PCR產物,採用T4DNA連接酶將pGL...
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常規的瓊脂糖凝膠電泳檢測細胞凋亡
...l蛋白酶K,37℃,30min。 9.加入12μl樣品稀釋液,含溴化乙錠的1.5%瓊脂糖電泳,觀察。作者:
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第三節 PCR操作範例及反應體系的組成
...糖凝膠電泳。一般情況下先在電泳緩衝液或凝膠中加1%溴化乙錠(EB)(每100ml加100μl),然後將已經制備好的1%~2%瓊脂糖凝膠(用電泳緩衝液配製)放入電泳槽內,加入待測樣品10μl,同時用分子量標準品作標記。瓊脂糖濃度應...
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雙重PCR-毛細管電泳法快速檢測大豆中轉基因成分
...l上樣buffer混合後上樣於30g/L瓊脂糖凝膠中(含0.1μg/ml溴化乙錠)。在0.5×TBE電泳緩衝液中,於100V電壓下,電泳50min,採用pUC19DNA/MspI(HpaⅡ)DNAMarker同時電泳,然後用UVI紫外成像分析儀觀察結果。2結果與討論2.1毛細管電泳條件的...