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成年大鼠骨髓多能成體祖細胞的克隆化培養及其鑑定
...6Vol.27No.7P.474-4784(上海)爲了優化培養條件,獲得體外克隆化培養的成年大鼠骨髓多能成體祖細胞(rMAPC),並對其進行表型分析及分化潛能鑑定。研究者選擇低血清條件培養基全骨髓直接貼壁法初步分離大鼠骨髓幹細胞,用極限...
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小鼠趨化素樣因子超家族成員1cDNA的克隆化和鑑定
...文進行了小鼠趨化素樣因子超家族成員1(Cklfsf1)cDNA的克隆化。方法利用生物信息學、PCR、DNA測序等方法克隆Cklfsf1,利用RT-PCR、NorthernBlot和激光顯微切割(LCM)等手段研究Cklfsf1的正常組織表達譜、睾丸組織不同細胞表達譜。結...
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小鼠胸腺樹突狀細胞系的克隆化及基本鑑定
小鼠胸腺樹突狀細胞系的克隆化及基本鑑定中國免疫學雜誌1999年第6期第15卷分子與細胞免疫學作者:①裴麗紅 劉祝公 陳慰峯單位:北京醫科大學免疫學系,北京100083關鍵詞:胸腺;樹突狀細胞;細胞克隆;細胞因子 摘...
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單克隆抗體的製備
...,許多環節 需要加飼養細胞,如在雜交瘤細胞篩選、克隆化和擴大培養過程中,加入飼養細胞是十分必要的。常用的飼養細胞有:小鼠腹腔巨噬細胞(較爲常用)、小鼠脾臟細胞或胸腺細胞。也有人用小鼠成纖維細胞系3T3經放...
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第十一章 單克隆抗體的製備--第一節 雜交瘤技術的基本原理
...法選出抗體高分泌性的細胞;這一過程常被習慣地稱作克隆化。將這些陽性細胞再進行克隆化,應用特異性抗原包被的ELISA找出針對目標抗原的抗體陽性細胞株,增殖後進行凍存、體外培養或動物腹腔接種培養。作者:
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用甲基纖維素半固體培養基篩選雜交瘤細胞
...步驟就是使融合後的細胞進行單克隆培養。融合細胞的克隆化方法主要採用有限稀釋法[見:徐新來.細胞培養在雜交瘤技術中的應用.見:鄂 徵主編.組織培養和分子細胞學技術.北京:北京出版社,1995:207~214]。由於需要反...
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BrdU單克隆抗體的製備及鑑定
...與BrdU反應而與TdR無明顯交叉反應的雜交瘤細胞株,經克隆化培養後命名爲4F4。用這株細胞接種於小鼠腹腔可產生富含抗體的腹水,其抗體類型爲IgG類,ELISA法測其效價在1∶5000以上,FACS分析時稀釋度爲1∶400,BrdU體內和體外法參...
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第二節 抗體的製備
...,許多環節 需要加飼養細胞,如在雜交瘤細胞篩選、克隆化和擴大培養過程中,加入飼養細胞是十分必要的。常用的飼養細胞有:小鼠腹腔巨噬細胞(較爲常用)、小鼠脾臟細胞或胸腺細胞。也有人用小鼠成纖維細胞系3T3經放...
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抗HBsAg人IgG表達載體的構建及其在CHO細胞中的表達
...應部位。得表達載體pDHLHB2。 1.4 CHO細胞的轉染和克隆化培養 取表達載體DNA0.4μg,加到含有4μ1PlusReagent的25μ1無血清IMDM培養基中,室溫置15min;另取LipofectimAMINEReagent1μ1加入25μ1無血清IMDM中。以上兩種液體混合後室溫置15min...
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用重組人胰島素原類似物免疫製備抗胰島素單克隆抗體
...,與小鼠骨髓瘤細胞SP2/0融合。1.6雜交瘤細胞的篩選與克隆化採用間接抑制ELISA方法。用重組人胰島素原類似物包被ELISA反應板,10%的JM109免疫血清封閉,加入雜交瘤細胞培養上清液與之反應,再與辣根過氧化物酶(HRP)標記的兔...
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第五節 變異在醫學中的實際應用
...用其溶解細菌後在固體平板培養基中形成的噬菌斑予以克隆化。通過這些載體的利用,重組基因中的目的基因可被轉入宿主細菌進行基因產物的表達,從而獲得用一般方法難以獲得的產品,如胰鳥素、生長激素、干擾素等。遺傳...
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胃MALT型淋巴瘤24例臨牀病理分析
...樣分化;58.3%(14/24)可見反應性濾泡增生伴不同程度濾泡克隆化。2.2.3免疫組化腫瘤細胞LCA、CD20(+)和/或CD79a(+),CD45RO(-)。3討論3.1臨牀特點MALT型淋巴瘤是淋巴結外最常見的一種低度惡性B細胞淋巴瘤,其臨牀生物學行爲和組...
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人用單克隆抗體質量控制技術指導原則
...方案及免疫淋巴細胞製備的方法。 2.細胞融合與克隆化 採用適宜的方法進行融合、篩選及克隆化。 3.雜交瘤細胞檢定 (1)抗體分泌穩定性 連續克隆化後抗體陽性率達100%,經體外連續傳代3個月以上和反覆...
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我學者首次發現抗HBV末端蛋白雜交瘤細胞系
...細胞與骨髓瘤細胞SP2/0融合,接種培養。在進行篩選和克隆化的基礎上,應用ELISA法檢測出8個陽性克隆,經進一步擴大培養和反覆克隆後,終於從這8個陽性克隆中精確地篩選出了陽性率達100%的3個克隆細胞(即雜交瘤細胞系)。...
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益婦寧軟膠囊、莪術、哈蟆油抗MCF-7細胞增殖和誘導細胞凋亡的研究
...討其凋亡的機理。方法用益婦寧、莪術、哈蟆油作用於克隆化高轉移人乳腺癌細胞(MCF-7),進行細胞增殖抑制實驗、軟瓊脂集落形成試驗,並通過DNA片斷凝膠電泳法和TUNEL末端標記法檢測細胞凋亡。結果益婦寧軟膠囊、莪術可...
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抗BrdU單克隆抗體的製備及初步鑑定
...抗原包被濃度爲5μg/ml。 2 結果 融合細胞經6次克隆化培養,獲得3株抗體分泌持續陽性的細胞株,分別命名爲1aB3、3aD9、4aF8。經瓊酯免疫雙擴散試驗,3株細胞產生的小鼠腹水分別與IgG和IgG1標準血清間出現沉澱線,與其它...
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第二十三章 細胞因子和細胞粘附分子的檢測--第一節 細胞因子檢測概述
...基因表達的技術。目前所有公認的細胞因子的基因均已克隆化,故能較容易地得到某一細胞因子的cDNA探針或根據已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探針。利用基因探針檢測細胞因子mRNA表達的方法多種多樣,常使用斑點雜交...
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異常凝血酶原單克隆抗體的製備與鑑定
...培養上清進行篩選,選出與APT反應陽性的雜交瘤細胞。克隆化採用顯微鏡操作法,用特製的彎頭毛細管在倒置顯微鏡下吸出單個雜交瘤細胞後,逐個放入預先加有飼養細胞的培養板小孔中培養。 1.4 單克隆抗體的製備 將雜...
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艾滋病併發肺部感染
...測可以提高檢出敏感性,但價昂且特異性不夠高。利用克隆化的PC的DNA片段作診斷性探針檢測,則有較高特異笥和敏感性。已確診HIV感染或AIDS病人伴有前述臨牀、X線及實驗室資料,可以作出診斷。治療迄今AIDS尚無特效治療,其...
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第十節 艾滋病併發肺部感染
...測可以提高檢出敏感性,但價昂且特異性不夠高。利用克隆化的PC的DNA片段作診斷性探針檢測,則有較高特異笥和敏感性。已確診HIV感染或AIDS病人伴有前述臨牀、X線及實驗室資料,可以作出診斷。 迄今AIDS尚無特效治療,其...
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基因分析及相應的毛細管電泳體系研究
...和成人不同組織中的表達情況進行了研究,揭示出其與克隆化技術相比在速度、靈敏度和成本等方面的優勢。與此同時,針對醫學、分子生物學中對PCR產物進行定量分析的要求,開發出-個快捷PCR產物定量方法。據此方法可以通...
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基因分析及相應的毛細管電泳體系研究
...和成人不同組織中的表達情況進行了研究,揭示出其與克隆化技術相比在速度、靈敏度和成本等方面的優勢。與此同時,針對醫學、分子生物學中對PCR產物進行定量分析的要求,開發出-個快捷PCR產物定量方法。據此方法可以通...
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第二節 製備單克隆抗體的基本技術
...長依賴適當的細胞密度,因而,在培養融合細胞或細胞克隆化培養時,還需加入其他飼養細胞(feedercell)。常用的飼養細胞爲小鼠的腹腔細胞,製備方法爲用冷凍果糖液注入小鼠腹腔,輕揉腹部數次,吸出後的液體中即含小鼠...
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RNA的提取和cDNA合成
...病毒純化到的禽類成髓細胞病毒(AMV)逆轉錄酶和從表達克隆化的Moloney鼠白血病病毒反轉錄酶基因的大腸桿菌中分離到的鼠白血病病毒(MLV)反轉錄酶。AMV反轉錄酶包括兩個具有若干種酶活性的多肽亞基,這些活性包括依賴於RNA的DNA合...
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hAR-N單克隆抗體免疫學特性的研究及其應用
...液與Sp2/0細胞按常規方法進行融合-篩選-有限稀釋,3次克隆化後,擴大培養。 腹水誘生:成年雌性BALB/c小鼠提前1周腹腔注射降植烷和弗氏不完全佐劑各0.2ml進行預處理,腹腔注射雜交瘤細胞懸液5×106~1×107,9~10?d處死BALB/c...
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四軍醫大西京醫院成功建立胃癌GC9811P-GFP細胞株
...核表達載體質粒轉染胃癌細胞株GC9811-P,經過G418篩選和克隆化培養,用熒光顯微鏡及流式細胞儀作者:
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HBV基因組轉染對小鼠NIH3T3細胞內基質金屬蛋白酶組織抑制因子的轉錄調控作用
...。 1.2.3 原位雜交技術測定細胞內TIMP-1,TIMP-2mRNA 克隆化細胞懸液分別滴加於5張蓋玻片上,繼續培養24h,去培養基,PBS洗3次,4%多聚甲醛室溫固定30min,PBS洗3次,ProteinaseK1μg/ml37℃20min,0.2%甘氨酸PBS室溫15min,4%多聚甲醛後...
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抗人隱孢子蟲特異性單克隆抗體的製備
...ALB/C小鼠,取脾細胞與SP2/0細胞融合,經3~5次有限稀釋克隆化,獲得7株持續分泌抗體的雜交瘤細胞株,經流式細胞術檢測其反應性。結果獲得7株單克隆抗體分別命名爲JF1~JF7,對隱孢子蟲胞內和胞外的檢測無差異。結論所獲得...
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單克隆抗體技術
...長依賴適當的細胞密度,因而,在培養融合細胞或細胞克隆化培養時,還需加入其他飼養細胞(feedercell)。常用的飼養細胞爲小鼠的腹腔細胞,製備方法爲用冷凍果糖液注入小鼠腹腔,輕揉腹部數次,吸出後的液體中即含小鼠...
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肺黏膜相關淋巴組織型淋巴瘤的表型和IgH基因重排的檢測價值
...上皮病變,11例有反應性淋巴濾泡,10例有淋巴濾泡的克隆化,9例有血管受侵,4例有胸膜受侵,瘤細胞表達B細胞相關抗原。7例行IgH基因重排檢測,FR2陽性6例,FR3A陽性5例.TCRγ1和TCRγ2基因重排檢測均爲陰性。12例患者單純化療3例...