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第三節 DNA及寡核苷酸探針在原位雜交組織化學中的應用
...甲醛(PBS新鮮配製):室溫20min。 (7)PBS/5mmol/lMgCl2漂洗10min×2。 (8)脫水,自低濃度到高濃度,無水乙醇各3min,空氣乾燥。 2.預雜交封閉非特異性雜交位點,20μl/每張切片,42℃水浴半小時。 3.雜交10~20μl/...
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丙型肝炎病毒體外感染原代人胎肝細胞的研究
...片:用鑷子從培養板中取出細胞爬片,立即用0.01mol/L的PBS漂洗3次,每次30s。然後用4%多聚甲醛固定15min,再用PBS漂洗3次,置於-20℃保存,備免疫組化檢測細胞內的HCV抗原表達或用原位雜交對細胞內的HCVrNA進行定位。 細胞及培...
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雷公藤甲素對誘導CD4+、CD8+T細胞凋亡的作用
...抗人CD4或CD8單克隆抗體1μl,置冰上反應40min。用1×Hanks液漂洗兩次後用RPMI1640液重懸細胞,以1×108細胞加入補體(新鮮豚鼠血清)1ml,37°C,5%CO2孵箱中反應45min。用1×Hanks液充分漂洗後用RPMI1640液重懸,並以每孔1×105細胞培養於96孔...
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第二節 原位分子雜交技術在電鏡水平的應用
...交過程須注意防止鎳網上的雜交液幹掉。 7.雜交後漂洗 含50%甲酰胺的2×SSC液 37℃ 30min 含50%甲酰胺的1×SSC液室溫30min 無甲酰胺的1×SSC液室溫20min 樣品置1×SSc 4℃過夜 0.01mol/LPBS(pH7.2)室...
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核因子-kappaB的實驗研究
...1.1抽提核蛋白[5]藥物作用細胞1h後收集細胞,預冷的PBS漂洗2次,以BufferA(10mMHepes,pH7.9,10mMKCl,0.1mMEDTA,0.1mMEDTA,1mMDTT,0.5mMPMSF)重懸,10min後加入l0%NP40至終濃度0.6%,混勻後l2000rpm4℃離心20s,棄上清,以BufferB(20mMHepes,pH7.9...
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酶免疫電鏡操作步驟
...的雙面刀片切成50~100µm的薄組織再行固定1h~2h。3.漂洗以PBS液漂洗過夜,換液3~4次。4.血清孵育,25℃1h或4℃過夜,孵育的標本放置於加蓋的瓷盤內,底層墊數層紗布。防止抗血清乾燥凝固,不易洗脫,造成非特異性吸...
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第二節 cRNA探針在原位雜交組織化學
...可與組織產生較高的非特異性結合,但此缺陷可在雜交後漂洗液中加用酶漂洗來解決。最近,Wolf等(1987)建議插入確定長度的寡核苷酸至載體內產生cRNA分子,這種cRBA分子稱爲“寡核苷酸核酸探針”(oligoribo-probes)已被成功...
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組織染色後封片技巧
...顯色後,入蒸餾水洗3次。如是漂片染色,應在用蒸餾水漂洗後纔將其裱在粘附劑處理過的載玻片上。對生長在蓋玻片上的培養細胞,實驗過程是在培養板內完成的,終止顯色後,蓋玻片用蒸餾水漂洗,洗後儘量吸出水份。經漂...
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離體脊髓星形膠質細胞的純化與鑑定
...瓶後,在37℃、280r/min搖18h,倒去培養液並用新鮮培養液漂洗3次,將所得純化星形膠質細胞用二次酶消化法傳代,用含血清(10%)培養液將細胞密度調至1×106/mL,種植到培養皿中的蓋玻片上(用作免疫組化鑑定)和培養瓶內...
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組織切片的原位雜交細胞化學方法
...鹽液不接觸,但可保持盒內空氣溼潤。 (12)雜交後漂洗 ①以小燒杯盛適量4×SSC溶液,將載片一端斜插入溶液內,輕輕抖動以移除蓋玻片。 ②將載片置於有刻度的染色用小方玻缸內,加入42℃(預熱)4×SSC,3×20min。...
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慶大黴素對內側橄欖耳蝸傳出神經毒性作用的形態學觀察
...,室溫下行組化染色。首先經0.1%H2O2處理30min,0.1mol/LPBS漂洗,後用1%TritonX-100處理1h,0.1mol/L馬來酸緩衝液(pH6.0)漂洗,再置組化反應液(含35μmol/L碘代乙酰硫化膽鹼、5μmol/LK3Fe(CN)6、30μmol/LCuSO4、50μmol/L枸櫞酸鈉)中作用50min,經5...
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乳腺導管癌的診斷標準判斷初探
...(據一抗具體說明而定),酶修復或熱修復;(3)蒸餾水漂洗,置於PBS中;(4)滴加3%的過氧化氫阻斷過氧化物酶,避光孵育30min;(5)蒸餾水漂洗,置於PBS中5min2次;(6)在37℃下一抗孵育120min;(7)PBS漂洗5min2次;(8)在37℃下Envisi...
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雷公藤對哮喘豚鼠IL-5、GM-CSF基因轉錄的影響及作用機制
...。細胞塗片ISH的主要步驟如下:0.3%TritonX-100通透10min,PBS漂洗,0.1mol/L甘氨酸漂洗5min,4%PFA固定5min,PBS漂洗,0.25%(V/V)乙酸酐/0.1mol/L三乙醇胺漂洗10min,2×SSC37℃漂洗10min,加探針雜交液後置溼盒內42℃孵育過夜,系列SSC漂洗,4%PFA...
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幾種飼料去黴去毒法
...飼料進一步乾燥,以達到去黴防黴變的目的。 2.漂洗法 對玉米、大豆等顆粒狀原料,用清水漂洗或用2%石灰水進行反覆漂洗,即能去除黴菌毒素。 3.熱處理法 對於餅粕類原料,在150℃的溫度下焙...
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供應室工作流程及注意事項
...作去污的過程包括6個步驟:分類、浸泡、清洗、用自來水漂洗、用去離子水漂洗、乾燥。(1)分類:不要直接用手進行分類,銳利物品必須放在防刺容器內進行傳送。(2)浸泡:用1%~2%的食用鹼浸泡玻璃物品,用洗滌劑浸泡大量...
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乳腺導管癌診斷標準的建立與應用
...切片(據一抗具體說明而定),酶修復或熱修復;(3)蒸餾水漂洗,置於PBS中;(4)滴加3%的過氧化氫阻斷氧化物酶,避光孵育30min;(5)蒸餾水漂洗,置於PBS中5min2次;(6)在37℃下一抗孵育120min;(7)PBS漂洗5min2次;(8)在37℃下Envision孵育45min...
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脫基質型松質骨對成骨細胞內遊離鈣及鹼性磷酸酶水平的影響
...消化15min,棄消化液,再次加入消化液,30min後棄去。PBS漂洗兩次後加入消化液,37℃消化90min後收集上清液,1000rpm離心10min收集細胞,PBS漂洗並離心兩次。加入10%小牛血清以1×106/ml接種於50ml培養瓶中,於37℃、5%CO2培養箱中培養...
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流感病毒對MDCK細胞核轉錄因子表達的影響
...S-P染色在0、12、24、72h各時相點分別挑取玻片,用0.1mol/LPBS漂洗3次,加4%多聚甲醛50μl固定40min,0.1mol/LPBS漂洗3次,3%過氧化氫室溫下10min,0.1mol/LPBS漂洗3次,加5%山羊血清於37℃靜置30min,吸棄血清,加1:100稀釋的P65抗體,於37℃靜置3h,4℃過...
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地高辛標記cRNA探針
...制)10min。 (5)在4%多聚甲醛/PBS3min。 (6)以PBs漂洗2×3min。 (7)浸入新鮮配製的0.25%乙酸酐(0.1mol/L三乙醇胺配製)10min,以封閉非特異性結合部位。 (8)2×SSC漂洗15min。 2.雜交以含cRNA探針(0.5ng/ml)的雜...
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地高辛配基隨機標記DNA探針
...洗膜液計算。 (1)在室溫下用2×SSC/0.1%(W/V)SDS溶液漂洗,5min,2次。 (2)在65℃條件下用0.1×SSC/0.1%SDS溶液漂洗,10min,2次。 (3)在室溫下用2×SSC溶液漂洗1次。 5.免疫測定 (1)配製溶液 緩衝液1:Tris...
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大豆餅粕提取乾酪素技術
...質溶液中,調pH4~4.5,靜置3~4小時使其完全沉澱。 4漂洗 用虹吸法吸去沉澱物上層之清水,再加入清水攪勻沉澱後去除水,如此反覆4~5次,使pH值保持在5~6。 5乾燥 把漂洗後的沉澱物用離心機離心去水,置於50...
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放射免疫對流電泳
...電流2.6cm×7.5cm的小板用4mA。4.電泳後,平板浸在3%HCl中漂洗8h,換液2次。5.用流水漂洗過夜。6.乾燥室溫或鼓風機吹乾。7.曝光在暗室將膠片切成與平板一樣大小,然後將藥面密接凝膠面,再在膠片上壓一張玻板,用黑布包...
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桔皮油的加工
...--- 生產桔皮油的工藝流程:原料→選擇→浸灰水→漂洗→壓榨→過濾→分離→靜置與抽濾→包裝。 技術要點: (1)原料的選擇新鮮無黴爛的紅桔、南寧桔、三湖蜜桔、溫州蜜柑及椪柑等果皮均可供製冷榨桔皮油...
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擔體的相關知識介紹
...處理擔體20-30分鐘,然後用自來水沖洗至中性,再用甲醇漂洗,烘乾備用。此法主要除去擔體表面的鐵等無機物雜質。2、鹼洗法:用10%的氫氧化鈉或5%的氫氧化鉀-甲醇溶液浸泡或迴流擔體,然後用水沖洗至中性,再用甲醇...
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桔皮油的加工
...--- 生產桔皮油的工藝流程:原料→選擇→浸灰水→漂洗→壓榨→過濾→分離→靜置與抽濾→包裝。 技術要點: (1)原料的選擇新鮮無黴爛的紅桔、南寧桔、三湖蜜桔、溫州蜜柑及椪柑等果皮均可供製冷榨桔皮油...
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使用擔體處理原因和方法
...理擔體20-30分鐘,然後用自來水沖洗至中性,再用甲醇漂洗,烘乾備用。此法主要除去擔體表面的鐵等無機物雜質。 2、鹼洗法:用10%的氫氧化鈉或5%的氫氧化鉀-甲醇溶液浸泡或迴流擔體,然後用水沖洗至中性,再用甲...
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脊髓腹側神經元的純化培養與鑑定
...用NF200分別與ChAT和GFAP進行免疫熒光雙標,棄培養液,PBS漂洗2次後加入4%PFA室溫固定30min,PBS漂洗5min×4,加NF200抗體(1∶1000)每蓋片50μl,37℃溼盒孵育1h後4℃冰箱過夜,PBS漂洗5min×3次,TRITC標記山羊抗小鼠IgG(1∶400)37℃...
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龜膠熬製技術
...盤肉腐爛,皮板分離後放掉穢水,再加入清水攪拌沖洗,漂洗除掉黑皮,將漂洗過的龜板再用清水浸泡1~2個月,取出攤置於陽光下曝曬,每日翻動3~4次,任夜間露水或雨水淋洗。待幹備用。 2.煎取膠汁。熬取膠汁,一般在...
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第一節 原位雜交技術在染色體鋪片的應用
...或其它的清潔液內過夜,次日用自來水沖洗,繼之蒸餾水漂洗,在60~75℃乾燥,然後把載片孵育在2%丙酮液內,室溫,60min。自來水沖洗,再在60~75℃乾燥; (13)每張載片上加10μl的細胞混懸液,空氣乾燥,在24h後可應用...
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光敏生物素核酸探針原位雜交組化程序
...保溫12~16h。 (11)4×SSC洗脫蓋片,並在同一液中37℃漂洗10~30min。 (12)2×SSC(含20μg/mlRNaseA,適於RNA探針)沖洗30min,37℃。 (13)1×SSC,0.1×SSC,37℃各漂洗10~30min。 (14)0.05mol/lPBS沖洗4×5min。 (15)3%BSA(0....