4 phi(φ)小體染色的醫學檢查
phi(φ)小體染色4.1 檢查名稱
phi(φ)小體染色
4.2 分類
血細胞化學染色
4.3 phi(φ)小體染色的測定原理
由於白血性原、幼粒(單)細胞內某種特異性生物化學的紊亂,致使細胞器內具有氫過氧化物酶(HPO)活性的軸類晶體所排出的球狀顆粒發生畸變而分離,或是由於嗜天青顆粒的畸變與腫脹,進而形成φ小體。當採用3,3′-二氨基聯苯胺(DAB)/H2O2基質液孵育,及銅鹽處理的HPO染色技術,這種HPO陽性的小體即能催化DAB起過氧化反應而被染色。
4.4 試劑
1.25%戊二醛
1% 甲醛
(2)0.05mol/L Tris-HCl緩衝液(pH 7.3~7.6)。
(3)9.0g/L NaCl液。
(4)基質液(須於臨用前現配)。
(5)5.0g/L硝酸銅液(用0.05mol/L Tris-HCl pH 7.3~7.6緩衝液配製)。
(6)Wright-Giemsa(復染)液。
(7)改良Papanicolaou(復染)液。
先將蘇木精溶於熱蒸餾水中,加硫酸鉀鋁、碘酸鈉,攪至全溶,再加水合氯醛和檸檬酸,加熱至沸5min,冷卻後過濾備用。
②稀鹽酸乙醇液:取濃鹽酸0.5ml,加70%乙醇至100ml。
③稀碳酸鋰溶液:在100ml蒸餾水中,加飽和碳酸鋰1至數滴。
④橘黃G6液:以橘黃G60.5g溶於5ml蒸餾水中,再加無水乙醇至100ml。
⑤EA50:可由下列染料配製而成。
A.亮綠液:亮綠(1ight green)0.5g溶於5ml蒸餾水中,再加無水乙醇至100ml。
B.俾斯麥棕液:俾斯麥棕0.5g溶於5ml蒸餾水中,再加無水乙醇至100ml。
C.黃色伊紅液:黃色伊紅(eosin Y)0.5g溶於5ml蒸餾水中,再加無水乙醇至100ml。
將上述亮綠液27ml、俾斯麥棕液10ml、黃色伊紅液45ml混合後加95%乙醇至100ml,再加磷鎢酸0.2g和飽和碳酸鋰液1滴,混勻。
(注:國外有成品EA50出售)
⑥各種不同濃度乙醇。
4.5 操作方法
(1)DAB染色步驟:乾燥骨髓(血)片用戊二醛-甲醛固定液固定2min,生理鹽水漂洗後保存於鹽水內直至下一步染色止。置基質液中孵育3min,0.05mol/L Tris-HCl(pH7.3~7.6)快速漂洗3次,置5.0g/L,硝酸銅液內2min,生理鹽水漂洗,幹後直接鏡檢或經復染後鏡檢。
(2)改良巴氏復染步驟:
①DAB染色完畢後標本仍保存於生理鹽水中,直至下步染色開始。
②在蘇木精染液內染1min,取出後水洗。
④稀碳酸鋰內1min,水洗2min。
⑤依次在50%、70%、80%、95%乙醇內脫水各0.5min。
⑥在橘黃G6中染1min。
⑦95%乙醇內浸洗2次,每次10s。
⑧在EA50液內染10min。
⑨95%乙醇內浸洗2次,每次3min。
⑩無水乙醇內浸洗2次,每次1min。
4.6 正常值
光鏡下φ小體呈棕色細棒狀或紡錘形、大圓顆粒形,1條或多條。
4.7 化驗結果臨牀意義
主要見於急性髓性白血病(急粒、急性早幼粒、急性單核細胞白血病)患者的原、幼細胞,以及一些慢粒的“髓性”急變者的原、幼細胞中。
4.8 附註
因此,Φ小體染色具有很強的病理意義,有助於白血病類型的鑑別。