化妝品中4-氨基偶氮苯和聯苯胺的檢測方法

1 拼音

huà zhuāng pǐn zhōng 4-ān jī ǒu dàn běn hé lián běn àn de jiǎn cè fāng fǎ

《化妝品中4-氨基偶氮苯和聯苯胺的檢測方法》由國家食品藥品監督管理局於2012年1月18日國食藥監保化[2012]13號發佈。

化妝品中4-氨基偶氮苯和聯苯胺的檢測方法

2 1　範圍

本標準規定了使用氣相色譜–質譜法測定化妝品中4-氨基偶氮苯和聯苯胺的含量。

本標準適用於粉、霜、露、膏、乳、油、液類化妝品中4-氨基偶氮苯和聯苯胺的測定。

本標準的濃度適用範圍爲0.5 mg/Kg～10mg/Kg，4-氨基偶氮苯及聯苯胺的檢出限（3s）均爲0.5 mg/Kg，定量下限（10s）分別爲2.0 mg/Kg、2.5 mg/Kg。

3 2　原理

試樣在氨水-氯化銨緩衝溶液（pH = 9.5）中經叔丁基甲醚超聲萃取後，使用硅膠-中性氧化鋁混合填充的固相萃取小柱進行淨化，叔丁基甲醚爲淋洗液，濃縮後進樣，經氣相色譜分離、質譜檢測器測定，使用保留時間、待測組分特徵離子丰度比雙重模式進行定性，外標法對各組分定量離子峯面積進行定量。

4 3　試劑及材料

除特別說明外，所有試劑均爲分析純；水爲符合GB/T 6682規定的一級水。

3.1　標準物質：4-氨基偶氮苯，純度≥99.0%。

3.2　標準物質：聯苯胺，純度≥98.5%。

3.3　正己烷：色譜純。

3.4　甲醇：色譜純。

3.5　叔丁基甲醚：色譜純。

3.6　無水硫酸鈉。

3.7　氯化銨。

3.8　氨水：25%。

3.9　氯化鈉。

3.10　硅膠：100～200目，使用前於160 ℃下烘12 h。

3.11　中性氧化鋁：100～200目，使用前於180 ℃下烘12 h。

3.12　氨水–氯化銨緩衝溶液：稱取13.4 g 氯化銨、量取18.5 mL氨水於250 mL燒杯中，加水溶解後轉移至500 mL容量瓶，定容，配製成pH=9.5的緩衝溶液。

3.13　標準溶液

3.13.1　4-氨基偶氮苯標準儲備溶液：準確稱10.0 mg 4-氨基偶氮苯準品於10 mL容量瓶中，加入少量甲醇溶解，並用甲醇定容至刻度，溶液濃度爲1 mg/mL。將標準溶液轉移到安瓿瓶中於4℃保存。

3.13.2　聯苯胺標準儲備溶液：準確稱10.0 mg聯苯胺準品於10 mL容量瓶中，加入少量甲醇溶解，並用甲醇定容至刻度，溶液濃度爲1 mg/mL。將標準溶液轉移到安瓿瓶中於4℃保存。

3.13.3　混合標準中間溶液：取一定量4-氨基偶氮苯和聯苯胺的儲備液，用甲醇稀釋成混合標準中間溶液，溶液濃度爲0.1 mg/mL。將混合標準中間溶液轉移到安瓿瓶中於4℃保存。

3.13.4　混合標準工作液：用甲醇將一定量的混合標準中間溶液配製成相應濃度的混合標準工作液。將混合標準工作液轉移至安瓿瓶中於4℃保存。

5 4　儀器和設備

4.1　氣相色譜-質譜儀。

4.2　分析天平：感量0.0001 g。

4.3　超聲波振盪器。

4.4　離心機。

4.5　氮氣吹掃裝置。

4.6　玻璃固相萃取柱：內徑1 cm，長度10 cm。

4.7　圓底螺口玻璃離心管：50 mL。

4.8　濾膜：0.45 μm有機相濾膜。

4.9　分液漏斗振盪器。

4.10 K-D濃縮瓶：30 mL。

6 5　分析步驟

5.1　提取

稱取0.5 g試樣（精確到0.001 g）50 mL圓底螺口玻璃離心管（4.7），加入1.0 mL氨水–氯化銨緩衝溶液（3.12），振盪混勻，加入10 mL叔丁基甲醚，密封於45 ℃下超聲萃取15 min。按照化妝品類型進行以下樣品操作：

1）對於液態的化妝品，如爽膚水、啫喱水、香水等，待樣品冷卻後，加入10 mL水、5 g氯化鈉，在分液振盪器上振盪10 min，取下，離心5 min，移取5 mL上層溶液，加入0.5 g無水硫酸鈉靜置15 min，將無水硫酸鈉除水後的溶液轉移至30 mL K-D濃縮瓶（4.10）中溶液用緩慢的氮氣流吹至近幹，濃縮過程中採用8 mL叔丁基甲醚分三次淋洗K-D濃縮瓶內壁，最後用叔丁基甲醚定容至1.0 mL，過0.45 μm濾膜（4.8），供GC-MS測定。

2）對於固體或膏狀的化妝品，如洗髮水、沐浴露、染髮劑、指甲油、胭脂等，待樣品冷卻後，離心5 min，移出上層溶液，加入0.5 g無水硫酸鈉靜置15 min；將溶液轉移至30 mL K-D濃縮瓶（4.10）中濃縮至1.0 mL，濃縮過程中採用8 mL正己烷分三次淋洗K-D濃縮瓶內壁，用緩慢的氮氣流將溶液吹至近幹，加入0.5 mL正己烷溶解後進行以下淨化步驟：

稱取800 mg硅膠和1200 mg中性氧化鋁（2:3，m/m），充分混勻，用幹法裝入玻璃固相萃取柱，輕敲至實。使用前用4 mL叔丁基甲醚預淋洗淨化柱，棄去淋洗液。將上述正己烷溶液轉移至硅膠–中性氧化鋁混裝的淨化柱，並用1 mL正己烷分兩次洗滌器皿，洗滌液轉移至固相萃取小柱。待樣品過柱後，用15.0 mL叔丁基甲醚將目標物洗脫，用30 mL K-D濃縮瓶（4.9）收集洗脫液，氮氣吹掃、濃縮至近幹，濃縮過程中用8 mL叔丁基甲醚分三次淋洗K-D濃縮瓶內壁，叔丁基甲醚定容至1.0 mL，供GC-MS測定。

5.2　測定

5.2.1　氣相色譜-質譜檢測參考條件

進樣口溫度300℃。載氣爲氦氣（純度≥99.999%），恆流方式，流速1.0 mL/min。色譜柱爲DB-35 MS柱，30 m× 0.25 mm（i.d.）× 0.25 μm，或相當者；柱升溫程序爲：初始溫70 ℃，保持0.5 min後以30 ℃/min升至270 ℃，保持2.0 min，再以25 ℃/min升至310 ℃至待測物質全部流出。進樣方式爲分流進樣模式，分流比爲7:1，進樣量1.0 μL。離子源爲EI源，電離能量：70 eV。色譜-質譜接口溫度280℃，四極杆溫度150 ℃，離子源溫度230 ℃。溶劑延遲3 min。測量方式爲全掃描/選擇離子監測（Scan/SIM）同時採集模式，兩種待測物質的參數見表1。

表1  4-氨基偶氮苯和聯苯胺的保留時間及特徵離子

注：選擇離子中帶“^*”的爲定量離子。

5.2.2　氣相色譜-質譜分析及結果確證

根據試樣中被測物質含量，選定適宜濃度標準工作液，使待測樣液中4-氨基偶氮苯、聯苯胺的響應值均在儀器檢測的線性範圍內。如果樣液的檢測響應值超出儀器檢測的線性範圍，可適當稀釋後進行測定。

在5.2.1氣相色譜–質譜條件下，4-氨基偶氮苯、聯苯胺標準物質的參考保留時間和氣相色譜–質譜選擇離子色譜圖見圖1。

圖1  4-氨基偶氮苯和聯苯胺的氣相色譜-質譜選擇離子色譜圖（0.5 mg/L）

色譜峯：1.  4-氨基偶氮苯；2.  聯苯胺

按照5.2.1條件，測定標準工作液及試樣溶液。參考表1、表2中的保留時間、待測組分的特徵離子丰度指標進行確證。

表2  4-氨基偶氮苯和聯苯胺的特徵離子丰度指標

注：允許相對偏差爲特徵離子相對於定量離子丰度的偏差。

7 6　結果計算

6.1　液態樣品結果計算

試樣中4-氨基偶氮苯和聯苯胺含量分別按（1）計算，結果保留到小數點後二位：

（1）

式中：

W_i— 試樣中4-氨基偶氮苯和聯苯胺的含量，單位爲 mg /Kg；

c_i— 標準校正工作曲線得到的樣品中4-氨基偶氮苯和聯苯胺的濃度，單位爲mg /L；

V— 樣液最終定容體積，單位爲 mL；

m— 試樣的質量，單位爲 g。

6.2　固態或膏狀樣品的結果計算

試樣中4-氨基偶氮苯和聯苯胺含量分別按（2）計算，結果保留到小數點後一位：

式中：

W_i— 試樣中4-氨基偶氮苯和聯苯胺的含量，單位爲 mg /Kg；

c_i— 標準校正工作曲線得到的樣品中4-氨基偶氮苯或聯苯胺的濃度，單位爲mg /L；

V— 樣液最終定容體積，單位爲 mL；

m— 試樣的質量，單位爲 g。

8 7　方法回收率、精密度

7.1　回收率

本方法中4-氨基偶氮苯和聯苯胺的回收率在85%～115%之間。

7.2　精密度

在重複性條件下獲得兩次獨立測試結果的絕對差值不大於這兩次測定結果算術平均值的15%。