1 概述
以常用熒光素作爲標記物的熒光免疫測定往往受血清成分、試管、儀器組件等的本底熒光干擾，以及激發光源的雜射光的影響，使靈敏度受到很大限制。時間分辨熒光免疫測定（timeresolvedfluorescenceimmunoassay，TR-FIA）是針對這缺點加以改進的一種新型檢測技術。
2 時間分辨熒光免疫測定的基本原理
時間分辨熒光免疫測定的基本原理是以鑭系元素銪（Eu）螯合物作熒光標記物，利用這類熒光物質有長熒光壽命的特點，延長熒光測量時間，待短壽命的自然本底熒光完全衰退後再行測定，所得信號完全爲長壽命鑭系螯合物的熒光，從而有效地消除非特異性本底熒光的干擾。TR-FIA的測定原理見圖17-4。以雙抗體夾心法爲例的測定反應程序見圖17-5。其中增強液的作用是使熒光信號增強。因爲免疫反應完成後，生成的抗原－抗體－銪標記物複合物在弱鹼性溶液中，經激發後所產生的熒光信號甚弱。在增強液中可至pH2～3，銪離子很容易解離出來，並與增強液中的β-二酮體生成帶有強烈熒光的新的銪螯合物，大大有利於熒光測量。
圖17-4 TR-FIA測定原理示意圖
時間分辨熒光免疫測定使用的儀器
時間分辨熒光免疫測定所用檢測儀器爲時間分辨熒光計，與一般的熒光分光光度計不同，採用脈衝光源（每秒閃爍1000次的氙燈），照射樣品後即短暫熄滅，以電子設備控制延緩時間，待非特異本底熒光衰退後，再測定樣品發出的長鑭系熒光。檢測靈敏度可達0.2～1ng/ml。