詞條 PCR實驗技術 修訂歷史

關於PCR實驗技術

PCR引物設計PCR引物設計的原則PCR引物設計的目的是爲了找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地擴增模板DNA序列。因此，引物的優劣直接關係到PCR的特異性與成功與否。要設計引物首先要找到DNA序列的保守區。同時應預測將要擴增的片段單鏈是否形成二級結構。如這個區域單鏈能形成二級結構，就要避開它。如這一段不能形成二級結構，那就可以在這一區域設計引物。現在可以在這一保守區域裏設計一對引物。一般引物長度爲15~30鹼基，擴增片段長度爲100~600鹼基對。讓我們先看看P1引物。一般引物序列中G+C含量一般爲40%~60%。而且四種鹼基的分佈最好隨機。不要有聚嘌呤或聚嘧啶存在。否則P1引物設計的就不合理。應重新尋找區域設計引物。同時引物之間也不能有互補性，一般一對引物間不應多於4個連續鹼基的互補。引物確定以後，可以對引物進行必要的修飾，例如可以在引物的5′端加酶切位點序列；標記生物素、熒光素、地 ...