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層析技術(Layer-analisetechnique)
離子交換層析技術是以離子交換纖維素或以離子交換葡聚糖凝膠爲固定相,以蛋白質等樣品爲移動相,分離和提純蛋白質、核酸、酶、激素和多糖等的一項技術。 (一)原理 在纖維素與葡聚糖分子上結合有一定的離子基...
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DEAE-纖維素與Sephadex1比較
項目DEAE纖維素Sephadex交換量小較大非特異性吸附較大小分離純度較好好分離時間較粗較長應用範圍較窄較寬預處理繁瑣方便作者:
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分離的血清與所需DEAE—纖維素量及其他條件的大致關係
血清樣品量(ml)DEAE需用量(g)選層析柱規格(cm)選脫液量(ml)1~221×25100~150552×12200~30010102×20300~40020202×37400~800作者:
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IgG的分離與提純
...的產物即爲優球蛋白,Euglobin,含γ球蛋白)。10.過DEAE-纖維素層析柱。(裝柱過程見層析技術)。以0.01Mol/LpH7.4PBS(0.03Mol/LNaCl)洗脫,收集洗脫液。也可採用SephadexG150或G200柱。11.蛋白質及其定量鑑定(見本章第八節)。12.Ig...
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商品DEAE—纖維素和CM纖維素的類型和特性
纖維素形狀長度交換當量(毫克當量/克)蛋白質吸附容量(mg/g牛血清白蛋白)牀體積(ml/g)pH6.0pH7.6DE-22改良纖維12~4001.0±0.14507.77.7DE-23改良纖維(除細粒)18~4004508.39.1DE-32微粒型(幹)24~636606.06.7DE-52微粒型(溼)24~636606.06.3DE-11...
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第三節 動脈血管壁細胞間質成分的提取
...取 蛋白多糖具有可溶於4mol/L鹽酸胍的性質,再經DEAE-纖維素層析除去其他雜質,非蛋白多糖與蛋白多糖用不同濃度尿素可分段層析分開。 1.取動脈血管小心除去血管周圍脂肪組織和纖維膜,用冷0.5mol/lPBSpH7.8洗滌,2kr/min...
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銀耳孢子鹼提多糖的提取、分離及其結構分析
...水難溶性組分採用不同濃度的氫氧化鹼液梯度提取,DEAE-纖維素分離和純化,純化後的組分分別進行分子量測定,紅外光譜分析,水解並乙酰化後進行氣相色譜分析確定單糖組成及摩爾比。結果從銀耳孢子發酵物中分離得到四個...
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葡萄球菌腸毒素C的純化與標準參考品的製備研究
...截留濃縮。使SEC原液濃縮約10倍(336800ng/ml);再通過DEAE-纖維素柱層析使SEC純度達到46.1%。最後通過SephadexG-75分子篩過柱使SEC純度達到96.1%。經SDS-PAGE凝膠電泳上呈單一條帶。經與標準分子量蛋白的條帶比較,SEC的分子量約在28...
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免疫熒光非特異性染色的消除方法
...ephadexG-50裝柱,即可過濾2~3.5ml熒光抗體。 (四)DEAE纖維素柱層析法 標記過多或過少熒光素的抗體分子可用DEAE-纖維素柱層析法除去。方法如下: DEAE-纖維素柱的裝柱,洗脫、再生方法等與提純IgG方法相同。裝柱所...
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楮頭紅多糖的分離純化與生物活性檢驗*
...除小分子物質,冷凍乾燥得楮頭紅多糖粗品;採用DEAE-52纖維素柱層析和SephadexG-200凝膠柱層析進行分離純化;用TBA法考察多糖的抗脂質過氧化作用;採用CCl4急性肝損傷模型,測定其血清中AST變化。結論獲得一個楮頭紅多糖組分。...
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枸杞製藥廢渣中粗多糖的提取純化與相關成分分析
...渣粗多糖(總多糖),收率爲4.1%。 枸杞總多糖經DEAE纖維素(OH-型)柱層析次用水、0.01~0.1mol.L-1NaHCO3,0.01~1 mol.L-1NaOH水溶液洗脫(硫酸-苯酚法進行監測),其中用水洗脫部分得到的洗脫曲線爲一個寬峯且有裂分,用其...
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第五節 非特異性染色的消除方法
...ephadexG-50裝柱,即可過濾2~3.5ml熒光抗體。 (四)DEAE纖維素柱層析法 標記過多或過少熒光素的抗體分子可用DEAE-纖維素柱層析法除去。方法如下: DEAE-纖維素柱的裝柱,洗脫、再生方法等與提純IgG方法相同。裝柱所...
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Epstein-Barr病毒殼抗原gp125的純化和應用
...建立 將純化的抗原以0.2μg/條開始倍比稀釋吸附於硝基纖維素膜上用於檢測,陽性血清的抗體特異性地與纖維膜上的抗原結合,呈現一條紅色條帶,陰性血清孵育的抗原條帶呈無色;在0.05μg/條的抗原量時仍可檢測出陽性血清。...
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離子交換劑的類型與特點
交換劑名稱(纖維素)作用基團特點陰離子交換劑二乙氨基乙基DEAE+-O-C2H4N+(C2H5)2H最常用在pH8.6以下三乙氨基乙基DEAE+-O-C2H4N+(C2H5)2H氨乙基AE+-O-C2H4-NH2胍乙基強鹼性、極高pH仍有效陽離子交換劑羧甲基CM—-O-CH2-COO—最常用在pH4以上磷...
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人凝血酶原複合物分離純化技術推陳出新
...漿中分離純化出白蛋白、丙種球蛋白、α1-抗胰蛋白酶、纖維蛋白原和凝血因子。EBA技術適合處理組分複雜、料液黏度大、洗滌困難的物料。▲我國現狀:質量標準低於歐洲工藝水平有待提高關於PCC的質量標準,《中國藥典》200...
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DEAE-SephadexA-50純化免疫球蛋白F(ab’)2的研究
【摘要】目的採用DEAE-SephadexA-50純化,提高破傷風抗毒素免疫球蛋白F(ab’)2的純度。方法破傷風免疫血漿用胃蛋白酶消化、硫酸銨鹽析、明礬提純後的免疫球蛋白F(ab’)2,經DEAE-SephadexA-50純化並進行檢測。結果經上述方法消化2h,95%以...
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乙型肝炎病毒e抗原的純化及其在人血清抗體檢測中的應用
...色。 1.6 免疫條法 將純化的抗原經狹縫打點在硝基纖維素膜上,每孔50μl,用含5%脫脂奶的TBS緩衝液4℃封閉過夜,室溫乾燥後,切成約長1cm寬0.5cm的小條密封,-20℃凍存,使用時先後加入待檢血清及酶標抗體,室溫浮育1...
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豬血小板衍生生長因子的提取和純化
....7×104Bq。培養結束後用多頭細胞收集儀將細胞收集於玻璃纖維紙上,10%三氯醋酸、無水乙醇、乙醚洗滌,乾燥後置於液閃瓶中,每瓶加入5ml閃爍液(PPO4g,PPOP0.4g,二甲苯1000ml)。在LS6500型閃爍計數儀(Beckman)上進行計數,結果...
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豬血小板衍生生長因子的提取和純化
....7×104Bq。培養結束後用多頭細胞收集儀將細胞收集於玻璃纖維紙上,10%三氯醋酸、無水乙醇、乙醚洗滌,乾燥後置於液閃瓶中,每瓶加入5ml閃爍液(PPO4g,PPOP0.4g,二甲苯1000ml)。在LS6500型閃爍計數儀(Beckman)上進行計數,結果...
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靈芝多糖的提取
...,一般要經過純化。 (3)多糖的純化,去蛋白質和deae纖維素柱層析。去蛋白質一般採用sevag法:加入0.2倍多糖溶液體積的氯仿和0.04倍體積的正丁醇混合振盪半小時進行分離,直至氯仿與水的界面無沉澱爲止,且要重複處理2-3...
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降膽葡胺DEAE
藥物名稱降膽葡胺DEAE藥物別名降脂3號樹脂,英文名稱Saphadex說 明塊型:4g功用作用同消膽胺、用於Ⅱ型高脂血症。與氯貝丁酯有協同作用,可合用用法用量口服:1日12~16g分3~4次注意事項同考來烯胺作者:
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離子交換色譜法教程
Sober和Peterson於1956年首次將離子交換基團結合到纖維素上,製成了離子交換纖維素,成功地應用於蛋白質的分離。從此使生物大分子的分級分離方法取得了迅速的發展。離子交換基團不但可結合到纖維上,還可結合到交聯葡聚糖...
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siRNA的轉染
...認siRNA的大小和純度。爲得到高純度的siRNA,推薦用玻璃纖維結合,洗脫或通過15-20%丙烯酰胺膠除去反應中多餘的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和鹽離子。注意:化學合成的RNA通常需要跑膠電泳純化(即PAGE膠純化)。 2.避免RN...
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凝膠層析技術
...icro;)。顆粒越細,流速越慢,分離效果越好。表 DEAE-纖維素與Sephadex1比較項目DEAE纖維素Sephadex交換量小較大非特異性吸附較大小分離純度較好好分離時間較粗較長應用範圍較窄較寬預處理繁瑣方便(三)試驗方法1.凝膠的...
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多數刺梨多糖組分具神經營養活性
...刺梨多糖組分在神經營養方面的作用,研究人員採用DEAE-纖維素柱色譜及SepharosecL-6B凝膠柱色譜對刺梨粗多糖進行分離純化,得到RRTP-1~RRTP-8共8個多糖組分。凝膠柱色譜和聚丙烯酰胺凝膠電泳鑑定純度,採用大鼠嗜鉻細胞瘤PC12細...
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IgA的分離與提純
(一)材料與試劑配製1.DEAE52纖維素2.0.10Mol/LZnSO4液ZnSO4·7H2O2.88g加水至1000.00ml3.飽和硫酸銨溶液4.10%EDTA—Na5.SephadexG2006.0.01Mol/LpH7.4PB液7.0.10Mol/LpH6.4PB液8.血清(二)操作方法1.取血清加等量的0.1Mol/LZnSO4液,調pH至7.0,...
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常用交聯葡聚糖的類型與特性
類型性能離子基因反離子總交換容量(毫克當量/g)DEAE-sephadexA-25弱鹼性、陰離子交換劑DEAE+Cl—3.5±0.5DEAE-sephadexA-50QAE-sephadex-25弱鹼性、陰離子交換劑QAE+Cl—3.0±0.4QAE-sephadexA-50CM-A-sephadex25弱鹼性、陽離子交換劑CM—Na+4.5±0.5CM-sephadex...
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猴菇菌水溶性多糖化學結構研究
...的研究猴菇菌絲體的水溶性多糖化學結構。方法採用DEAE纖維素和sephadex柱分離純化,通過理化常數、化學和光譜分析研究其化學結構特徵。結果從猴菇菌絲體中分離得到5個多糖均一體,其成分HEPb分子量5.3×104,爲以葡萄糖爲主...
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陰溝腸桿菌及其糖蛋白組分的抑瘤效應
...步將該菌菌體經熱水抽提、季銨鹽沉澱、乙醇沉澱、DEAE-纖維素柱分離純化。得到F1、F2、F3、F4四種主要成分。採用形態觀察法將對數生長期的肝癌細胞QGY7703胰酶消化調整細胞數爲2×105個/毫升,以2倍比稀釋待測F1、F2、F3、F4組分...
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第一節 抗原的製備
...菌酶,37℃,保溫10min,細胞就破壞了。此外,蝸牛酶、纖維素酶也被選作破碎細菌細胞之用。 (3)表面活性劑處理法:較常用的有十二烷基磺酸鈉、氯化十二烷基吡啶、去氧膽酸鈉等。 (三)抗原的提取 提取、抽...