2 概述
羊水中的膽紅素系由胎兒紅細胞破壞產生的。進入羊水的途徑可能是通過肺或皮膚，多是未結合型膽紅素，早期妊娠時羊水中膽紅素含量高。隨着胎兒肝臟功能逐漸成熟及完善，胎兒體內的結合膽紅素逐漸增多，使羊水中的未結合膽紅素逐漸減少，在妊娠晚期、末期時濃度極低，甚至爲0。由於含量過少，用一般化學方法不易檢出，需用吸光度差測定。
3 羊水膽紅素的醫學檢查
3.1 檢查名稱
3.2 分類
3.3 取材
3.4 羊水膽紅素的測定原理
羊水中結合膽紅素可直接與重氮試劑反應，產生偶氮膽紅素；在同樣條件下，遊離膽紅素須有加速劑使膽紅素氫鍵破壞後與重氮試劑反應。咖啡因、苯甲酸鈉爲加速劑，醋酸鈉維持pH同時兼有加速作用。抗壞血酸（或疊氮鈉）破壞剩餘重氮試劑，中止結合膽紅素測定管的偶氮反應。加入鹼性酒石酸鈉使最大吸光度由530nm轉移到598nm，非膽紅素的黃色色素及其他紅色與棕色色素產生的吸光度降至可忽略而不計，使靈敏度和特異性增加。最後形成的綠色是由藍色的鹼性偶氮膽紅素和咖啡因與對氨基苯磺酸之間形成的黃色色素混合而成。
3.5 試劑
（1）咖啡因試劑：無水醋酸鈉82g，苯甲酸鈉75g，乙二胺四乙酸二鈉（EDTANa2）1.0g溶於約500ml的蒸餾水中，再加入咖啡因50g，攪拌至完全溶解，然後加蒸餾水稀釋至1000ml，過濾後置棕色試劑瓶中，室溫保存可穩定6個月。
（2）鹼性酒石酸鈉溶液：氫氧化鈉75g，酒石酸鈉（Na2C4H4O6·2H2O）263g，加蒸餾水溶解並稀釋至1000ml，混勻，置塑料瓶中，室溫保存可穩定6個月。
（3）0.725mol/L亞硝酸鈉溶液：亞硝酸鈉5.0g，加蒸餾水溶解並稀釋至100ml，置棕色瓶中，塞緊，4℃保存。若發現溶液呈淡黃色時，應丟棄重配。
（4）28.9mmol/L對氨基苯磺酸溶液：對氨基苯磺酸5g，加蒸餾水800ml，加濃鹽酸15ml，待完全溶解後，加蒸餾水至1000ml。
（5）重氮試劑：臨用前，取亞硝酸鈉應用液0.5ml加對氨基苯磺酸溶液20ml混合。
（6）5g/L疊氮鈉溶液：稱取疊氮鈉0.5g，用蒸餾水溶解並稀釋至100ml。
（7）膽紅素標準液：
①目前一般用遊離（非結合）膽紅素配製標準液，因此配製標準液的稀釋劑需含白蛋白。用人血清白蛋白太昂貴，可用牛血清白蛋白（40g/L）或人血清作替代物。後者方法如下：
羊水必要時可用濾菌器過濾。取過濾後的羊水1ml，加入24ml新鮮生理鹽水混合。在414nm波長，1cm光徑，以生鹽水調零點，其吸光度應小於0.1；在460nm的吸光度應小於0.04。
②配製標準的膽紅素需符合下列標準：純膽紅素的氯仿溶液，在25℃條件下，光徑1.000±0.001cm，波長453nm，摩爾吸光係數應在60700±1600範圍內，改良J-G法偶氮膽紅素的摩爾吸光係數應在74380±866。
③羊水貯存標準液，171μmol/L（10mg/dl）：準確稱取符合標準的膽紅素10mg，加入1ml二甲亞碸，用玻璃棒攪拌，使成混懸液。加入0.05mol/L碳酸鈉溶液2ml，使膽紅素完全溶解後，移入100ml容量瓶中，用稀釋羊水洗滌數次併入容量瓶中，緩慢加入0.1mol/L鹽酸2ml，邊加邊搖（勿用力搖動，以免產生氣泡）。最後以稀釋用羊水補足至100ml。配製過程中應儘量避光，貯存容器用黑紙包裹，置4℃冰箱3天內有效，但要求配後儘快作標準曲線。
3.6 操作方法
表1。
充分混勻後，波長600nm，對照管調零，讀取各管吸光度；或用水調零，讀取測定管及對照管吸光度，用測定管吸光度與對照管吸光度之差值（Au-Ac）在標準曲線上查出相應的膽紅素濃度。
3.7 正常值
早期妊娠：＜1.28μmol/L （＜0.075mg/dl）
足月妊娠：＞0.43μmol/L （＞0.025mg/dl）
3.8 化驗結果臨牀意義
在有溶血性疾病時，此項可作爲觀察指標，以決定是否繼續觀察，宮內輸血、引產。妊娠後期繼續升高，表示胎兒有胎內溶血症。當孕婦患有血膽紅素增高（肝炎、溶血性貧血、膽汁淤積）或服用某些藥物（酚噻嗪）時，則可出現羊水膽紅素僞增。