3 概述
免疫抑制酸性蛋白（immunosuppressive acidic protein，IAP）屬α1-酸性糖蛋白糖鏈結構異常的一種亞類組分。主要產生於肝細胞、巨噬細胞和粒細胞，其相對分子質量爲50kD，等電點爲3.0，含31.5%的碳水化合物；在體內它可抑制荷瘤宿主的體液免疫和細胞免疫功能。
4 免疫抑制酸性蛋白的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 化驗取材
4.4 免疫抑制酸性蛋白的測定原理
定量抗體（特異性抗血清）與定量加熱溶化的含有緩衝液的瓊脂或瓊脂糖在56～60℃溫度下混合、倒板、打孔、加待檢抗原，在合適的條件下，經一定時間的擴散後，在抗原抗體比例適合處，形成乳白色的沉澱環，見（圖1）。
在一定抗原濃度範圍內，沉澱環直徑的平方（D2）與抗原含量（X）成正比關係，即D2＝a＋bX，其中a爲截距，b爲斜率，a、b均與實驗條件有關。其前提是保證抗原有充足的擴散時間，即保證抗原達到擴散終點，與瓊脂板中抗體濃度成反比，即抗體濃度越大，沉澱環越小，所以，在進行單向免疫擴散時，應選擇適當濃度的抗體製成瓊脂板，以便得到大而清晰的沉澱環。
若事先用標準抗原繪製成標準曲線，則待檢標本中抗原含量，通過測量沉澱環大小，即可從標準曲線中求出。
該試驗特異性高，重複性好，方法簡便，臨牀上常用於檢測IgG、IgA、IgM與C3等的含量。現以免疫球蛋白檢測爲例。
4.5 試劑
（1）pH8.6 0.1mol/L的巴比妥緩衝液（巴比妥1.84g，巴比妥鈉10.3g，硫柳汞100mg加蒸餾水至500ml）。
（2）20g/L瓊脂：稱取20g優質瓊脂粉置於1000ml三角瓶中，加蒸餾水500ml，水浴煮沸溶解，然後再加上述熱pH8.6巴比妥緩衝液500ml，加0.1gNaN3防腐，混勻後根據制板要求分裝小試管備用。
（3）0.1g/L，硫柳汞生理鹽水：1000ml生理鹽水中含硫柳汞0.1g。
（4）參考血清：IgG、IgA、IgM。
（5）特異抗血清：羊抗人IgG、IgA、IgM。
（6）質控血清：含高、中、低三種不同濃度已知量的免疫球蛋白。
4.6 操作方法
（1）抗體瓊脂板的製備（按0.15ml/cm2來計算含抗體瓊脂量）：將抗血清按1/2效價用硫柳汞鹽水稀釋（如抗血清效價爲1∶20，則稀釋10倍），置56℃水浴中預熱10min後，傾入等體積已融化並降溫至56℃的20g/L瓊脂中，迅速混勻傾注在玻璃板（水平位置）上，待冷卻後，將抗體瓊脂板按預先繪製的模式圖打孔（孔徑3mm、孔距15mm）。
（2）待檢標本測定：被檢血清用硫柳汞稀釋，如檢測IgG一般作1∶50稀釋，IgA作1∶10稀釋，IgM作1∶4稀釋，以上各種稀釋度亦可按試劑盒介紹要求稀釋。用微量加樣器每孔加10μl（勿溢出孔外），每份標本至少加兩孔，求出平均值。第一排加不同稀釋度的參考血清（見標準曲線製備），其餘孔加經稀釋的待檢血清。每塊板加三孔質控血清以檢查實驗質量。靜置15min後，移入溼盒中，置37℃溫箱內擴散48h，取出精確量取沉澱環直徑（誤差不超過0.1mm）。如果沉澱環不清楚，浸泡生理鹽水2h，換水數次，再滴加10g/L鞣酸溶液10min後，水洗稍幹後測量其沉澱環直徑。
待檢標本根據沉澱環直徑大小，從標準曲線上求其含量，再乘以稀釋倍數，以g/L表示。
（3）標準曲線的製備：將標準參考血清用生理鹽水稀釋成不同濃度：
IgG：0.2，0.4，0.6，0.8，1.0g/L
IgA：0.2，0.4，0.6，0.8，1.0g/L
IgM：0.1，0.3，0.5，0.7，0.9g/L
分別加入相應的抗體瓊脂板一排孔內，每孔10μl，每種濃度加10孔，瓊脂板放水平溼盒內，37℃條件下IgG板擴散24h，IgA、IgM板擴散48h，觀察結果，求得不同濃度的標準參考血清所得沉澱環直徑平方的平均值。以沉澱環直徑平方值爲縱座標，以抗原含量爲橫座標，在直角座標紙上繪製標準曲線（A）。
單向免疫擴散定量試驗有人認爲（D-T）2-Qag爲最佳計算，如圖2B所示。它有以下特點：
①相關係數更接近於1，
②標準曲線由原來不通過零點到基本上通過零點。
爲了減少抗體稀釋度、擴散時間和溼度誤差的影響，建議每次實驗的抗體瓊脂中同時加入參考血清，採用（D-T）2-Qag計算，在直角座標紙上繪圖。
還有人建議以直徑爲自變量，抗原爲因變量，以Y＝a＋bX2爲迴歸方程，在直角座標紙上以X2值爲橫座標繪製標準曲線，這樣計算方便，誤差也小，適於一般實驗室採用。
4.7 正常值
血清：237±106mg/L。
4.8 化驗結果臨牀意義
（1）肺癌患者血清IAP明顯高於健康人和良性肺部疾病者，表明血清IAP水平可作爲鑑別肺部良、惡性疾病的一項較好指標。血清IAP水平檢測對肺癌患者術前細胞免疫功能的估計及術後的治療具有一定的臨牀意義。
（2）卵巢癌患者血清IAP水平明顯高於健康婦女和良性卵巢腫瘤。IAP值隨卵巢癌分期的增加而增加。化療後其血清IAP水平明顯下降；術後復發者血清IAP水平又明顯升高。表明血清IAP水平可作爲卵巢癌患者病情監測、治療反應及預後判斷的一項有用指標。子宮頸癌和子宮內膜癌患者血清lAP值亦可有明顯增高。
（3）急性胰腺炎、急性甲狀腺炎等疾病時，IAP值也會增高時，但多爲一過性增高。
4.9 附註
（1）試驗時必須嚴格控制孵育溫度及時間，以便達到擴散終點。在試驗擴散過程中，特別要防止溫度的急劇變化，以免出現雙圈。
（2）加樣後瓊脂板置溼盒中，必須保持水平位置，防止沉澱環的偏心。
（3）參考血清稀釋力求準確，每次實驗時有4～5個稀釋度作對照，即便操作相當熟練，試驗條件相當穩定，仍需在每塊瓊脂板上加三個質控血清，視檢測結果是否落在平均值線上下一個標準差範圍內，以檢查試驗的精密度和準確性。每塊板上參考血清幾個稀釋度沉澱環直徑與標準曲線同濃度沉澱環直徑相比，含量最高孔誤差不應大於0.3mm，含量最低孔不應大於0.1mm，其他孔不應大於0.2mm，否則要重新測定。
（4）測沉澱環直徑務需準確，若有誤差，再乘稀釋倍數，則誤差可成倍增加。如出現橢圓形沉澱環，需同時測定它的橫徑和豎徑，取其均值作爲沉澱環直徑。
（5）沉澱環大小與標本中抗原分子量大小有關。分子量小，擴散快，沉澱環相應較大；分子量大，擴散慢，相應沉澱環較小，如果標本中抗原分子量不均，常可形成雙層沉澱環，因此，除需要參考血清具有高特異性和高活性外，還要求標本與參考血清具有血清學上的均一性，否則可能出現結果偏高或偏低。