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基因診斷及其臨牀應用
...入突變、被分析的DNA中有無某個基因的存在等。 3.1.3單鏈構象多態性檢測(SSCP)單鏈構象多態性檢測是一種基於單鏈DNA構象差別來檢測點突變的方法。DNA經變性形成單鏈後,在中性條件下單鏈DNA會因其分子內鹼基之間的相互...
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胰腺癌p16基因mRNA異常表達的研究
...腺癌中p16基因mRNA的表達情況,同時應用聚合酶鏈式反應-單鏈構象多態性分析(PCR-SSCP)對其異常表達的原因進行分析,現將結果報道如下。 一、材料和方法 1.對象:新鮮胰腺癌組織10例取自中國醫科大學第一臨牀學院普通...
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第二節 常用基因診斷技術
...了時間,而且只要極少量的基因組DNA就可進行。 五、單鏈構象多態性診斷法 單鏈構象多態性(signlestrandconformationpolymorphism,SSCP)是指單鏈DNA由於鹼基序列的不同可引起構象差異,這種差異將造成相同或相近長度的單鏈DNA...
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系統性紅斑狼瘡患者白細胞介素-4受體基因多態性的研究
...斑狼瘡(SLE)患者發病的相關性。研究者採用聚合酶鏈反應-單鏈構象多態性(PCR-SSCP)和聚合酶鏈反應限制性片段多態性(PCR-RFLP)及DNA測序方法進行基因分型。結果ile50/ile50基因型與SLE易感性有顯著相關。其他基因型在兩組患者間的分...
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肝癌相關基因單核苷酸多態性基因芯片製備與檢測分析
...檢測分析,而對7例患者的部分檢測結果用聚合酶鏈反應-單鏈構象多態性法(PCR-SSCP)和測序進行驗證。結果顯示,芯片檢測的靈敏度爲6×10-3ng/μl,檢測重複率高於95.83%,隨探針濃度降低,雜交信號逐漸減弱。10份肝癌患者組織...
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P53基因突變與食管癌轉移關係臨牀研究
...變與食管癌淋巴結轉移的關係。方法採用聚合酶鏈反應-單鏈構象多態性(PCR-SSCP)結合銀染技術,對48例食管癌患者組織中P53基因第5~8外顯子進行了突變分析。結果48例食管癌標本中,P53基因第5~8外顯子出現突變者21例,其突...
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先天性無虹膜症家系的基因突變位點研究
...關;PCR擴增PAX6基因的所有外顯子,所有PCR產物分別進行單鏈構象多態性(SSCP)分析,通過患者與正常人帶型的差異確定突變發生的外顯子,對有差異SSCP帶型的PCR產物進行直接DNA測序,找到突變位點。結果該家系先天性無虹膜表型...
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新發現的中國人ATP結合盒轉運子A1基因M233V單核苷酸多態性及其家系調查
...者家系進行調查確定其意義。研究者用聚合酶鏈反應(PCR)-單鏈構象多態性分析(SSCP)-DNA測序及限制性酶切發現ABCA1基因新的SNP,進一步對先證者家系的16位成員進行血脂檢查、基因組DNA提取及限制性酶切分析。結果M233V是一個新發...
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遺傳性痙攣性截癱spastin、atlastin和paraplegin基因突變分析
...stin和paraplegin基因的突變特點,研究者應用聚合酶鏈反應-單鏈構象多態性(PCR-SSCP)結合DNA序列分析方法對24個常染色體顯性遺傳HSP家系和14例散發患者進行spastin基因和atlastin基因突變分析,對12個常染色體隱性遺傳HSP家系和14例散發...
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乳腺癌細胞p16基因的研究
...培養,反覆貼壁法純化人乳腺癌細胞,經多聚酶鏈反應-單鏈構象多態性(PCR-SSCP)分析技術,對14例純化乳腺癌細胞標本、14例新鮮未純化標本和27例石蠟包埋標本及相應的癌旁乳腺組織標本的p16基因突變率進行了對比性研究。結...
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中國一家系Brugada綜合徵相關基因SCN5A突變位點的檢測
...因突變檢測,同時對136例家系外健康對照者的該位點進行單鏈構象多態性分析。結果發現在Brugada家系中發現了兩個雜合變異,即SCN5A基因第二外顯子上發現一個同義變異(A129G),沒有導致氨基酸的改變(A29A);第26外顯子發現...
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結核分枝桿菌利福平耐藥基因rpoB突變特徵初步分析
...藥決定區(RRDR)81個鹼基在內的286bp片段進行聚合酶鏈反應-單鏈構象多態性(PCR-SSCP)分析,並對經檢測顯示有突變的結核分枝桿菌rpoB基因此擴增區域進行序列測定。其中利福平耐藥株73株,非利福平耐藥株11株,敏感株26株。結果PCR-S...
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Cav1.1基因26內含子67位點A/G多態性與甲狀腺功能亢進性週期性癱瘓的相關性研究
...)性週期性癱瘓(TPP)的相關性。研究者採用多聚酶鏈反應-單鏈構象多態性(PCR-SSCP)方法檢測46例男性TPP患者(TPP組)、68例男性甲亢患者(GD組)和72名男性健康對照者(CON組)Cav1.1基因26內含子-67A/G多態性。分析比較此多態位點基因型和等位...
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中國先天性缺失牙患者PAX9基因的新突變
...病的分子機制研究提供依據。研究者應用聚合酶鏈反應-單鏈構象多態性(PCR-SSCP)分析方法,對4個常染色體顯性遺傳少牙畸形家系(共45名成員,22例患者)中的13例患者和9名健康成員、16例散發性牙齒髮育不全患者以及196名健康對照...
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成年發病狼瘡鼠的T細胞受體Vβ基因測序分析
...中的TCRVβ6基因,對擴增產物進行基因克隆和DNA測序分析,單鏈構象多態性分析法(SSCP)鑑定廣泛浸潤的T細胞克隆TCRVβ6基因編碼的氨基酸基序。結果兩種成年發病狼瘡鼠的不同個體之間,廣泛浸潤於多臟器的T細胞克隆TCRVβ6基因的互...
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良性家族性嬰兒驚厥家系KCNQ2基因新突變
...直接測序技術進行KCNQ2基因突變分析,採用多聚酶鏈反應-單鏈構象多態性進行基因型和表型共分離研究。結果PCR-DNA直接測序在先證者第5號外顯子發現KCNQ2基因雜合突變G812T,導致KCNQ2蛋白孔區一個甘氨酸被纈氨酸替代(G27lⅤ),這...
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中性粒細胞集落刺激因子基因多態性與系統性紅斑狼瘡相關性的研究
...統性紅斑狼瘡(SLE)的相關性。研究者採用聚合酶鏈式反應-單鏈構象多態性(PCR-SSCP)方法對中國北方漢族人羣Csf3基因進行了單核苷酸多態性(SNP)的篩選,通過比較SNP各基因型和等位基因在正常人和SLE患者中分佈來研究Csf3與SLE/狼瘡腎...
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單發性與多發性瘢痕疙瘩轉化生長因子-β1Ⅱ型受體PolyA位點基因突變研究
...設計併合成引物,利用PCR儀擴增TβRⅡDNA;對PCR產物進行單鏈構象多態性分析(PCR-SSCP),PCR產物純化後,利用自動測序儀鑑定基因突變的類型。結果瘢痕疙瘩組織中TβRⅡPolyA位點表現出基因缺失突變,其陽性率多發性瘢痕疙瘩爲50%(3/...
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野生型p53對涎腺多形性腺瘤細胞突變基因的修復
...科大學口腔醫學院病理科王旭等研究人員研究顯示,PCR-單鏈構象多態性分析顯示,3例出現異常電泳帶。核酸序列測定結果顯示,第6外顯子的第203號密碼子點突變;第8外顯子的第272至290號密碼子之間出現鹼基缺失和鹼基插入。...
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湖北地區原發性先天性青光眼患兒CYP1B1基因的新突變研究
...1基因的第2、3外顯子,瓊脂糖凝膠電泳鑑定產物後,應用單鏈構象多態性(SSCP)、變性高效液相色譜分析(DHPLC)及DNA序列分析技術對患兒和對照組進行基因分析。結果發現7例PCG患兒呈現CYP1B1基因的第3外顯子第385密碼子的第1個...
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基因突變檢測技術
...鏈DNA不同的遷移率,從而使兩者被分離開。該方法原理與單鏈構象多態性(SSCP)相似,只不過SS-CP分離的是單鏈,而HA法分離的是雙鏈。HA法簡單迅速,但只適用於200~300pb的片段,且不能確定突變位置,檢出率只有80%左右,有人建議將HA法和S...
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基因檢測在遺傳性耳聾中的應用
...得很難通過一次測序獲得精確的數據。3.2限制酶切指紋-單鏈構象多態性分析(restrictionendonucleasefingerprinting-singlestrandconformationpolymorphism,REF-SSCP):限制性核酸內切酶切割目標基因的PCR擴增產物,瓊脂糖凝膠電泳檢測梅切產物,...
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PCR-RFLP-SSCP及測序用於霍亂弧菌ctx-AB基因多態性的研究
...PCR產物經RsaⅠ酶切爲317bp和211bp2個片段。對酶切產物進行單鏈構象多態性(SSCP)分析,銀染色法顯示結果。對不同SSCP類型測序,利用PCR方法直接對PCR產物測序。 霍亂弧菌O1羣古典型(CVC)標準株569B和16017,埃爾託型(EVC)標準株919,...
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苯丙酮尿症的篩查和治療進展
...診斷爲PKU[6]。(3)PCR檢測。金煜煒等[7]建立了聯合應用PCR-單鏈構象多態性和短串聯重複序列連鎖分析方法產前診斷PKU患兒,初步結果表明該方法準確性高,具有較高的臨牀應用價值。目前對PKU患者的篩查和臨牀檢驗已經達到基因...
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國人視網膜色素變性患者的RDS基因突變及表型研究
...用2對引物),以醋酸銨-異丙醇沉澱法回收PCR產物。通過單鏈構象多態性(SSCP)分析篩查RDS基因突變。沉澱回收PCR產物以20μl變性上樣液溶解後熱變性爲2條DNA單鏈後,上樣於8%非變性聚丙烯酰胺凝膠,700V電壓、4℃電泳16h,銀染...
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基於印刷電化學芯片技術的單核苷酸多態性快速、簡便檢測
...伸法,寡核苷酸連接分析法,聚合酶鏈反應產物DNA測序,單鏈構象多態性,質譜法及異源雙鏈技術等[5,6]。生物芯片[7,8]技術的出現及飛速發展爲高通量、自動化的基因檢測,包括單核苷酸多態性檢測提供了可能,基因芯片成...
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腎透明細胞癌中VHL基因改變和趨化因子受體CXCR4的表達及相關性
...探討VHL基因在CCRCC中的作用。方法分別採用聚合酶鏈反應-單鏈構象多態性分析、微衛星法、DNA甲基化特異性PCR和半定量逆轉錄PCR檢測35例CCRCC和20例正常腎組織中VHL基因突變、雜合性缺失(LOH)、異常甲基化及CXCR4mRNA的表達。結果VHL...
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毛細管電泳――基因突變及多態性分析新方法
...性分析方法以及毛細管電泳在該領域中的應用。主要包括單鏈構象多態性分析,變性梯度及溫度梯度電泳,雜合子分析,限制性片段多態性分析,等位基因特異性擴增,核酸雜交,引物擴展及小衛星和微衛星分析。關鍵詞:毛細...
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毛細管電泳――基因突變及多態性分析新方法
...性分析方法以及毛細管電泳在該領域中的應用。主要包括單鏈構象多態性分析,變性梯度及溫度梯度電泳,雜合子分析,限制性片段多態性分析,等位基因特異性擴增,核酸雜交,引物擴展及小衛星和微衛星分析。關鍵詞:毛細...
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三、HLA抗原的檢測
...PCR爲基礎的其它DNA分型所取代。 (3)PCR-SSCP:即PCR與單鏈構象多態性(singlestrandconformationpolymorphism,SSCP)分析相結合的方法。其原理是單鏈DNA可形成穩定的構象,在非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳中其遷移率不僅與鏈的大小有關...