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免疫-PCR技術進展
...,PCR技自從1985年問世以來,經過十幾年的發展,已成爲實驗室的常規技術,也是現代分子生物學研究中不可缺少的手段,是一種極爲敏感的放大系統。而免疫-PCR技術正是運用PCR的高度敏感性來放大抗原抗體反應的特異性,使實...
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實時PCR質量管理要素分析
【關鍵詞】聚合酶鏈反應實驗室科學質量管理聚合酶鏈反應(PCR)技術作爲現代分子生物學檢測的先進手段之一,爲多種疾病提供了核酸的診斷依據,但PCR技術是一種基因擴增技術,作爲一種分子生物學檢測手段其靈敏度達...
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廣東省醫學繼續教育項目——實用分子生物學實驗技術培訓班招生簡章
-廣東省繼續醫學教育項目-實用分子生物學實驗技術培訓根據廣東省繼續醫學教育項目計劃安排,中山大學藥學院分子生物學實驗室擬於2007年11月12日至11月18日舉辦實用分子生物學實驗技術培訓。培訓以實用分子生物學的基本實...
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尿嘧啶DNA糖基化酶在熒光定量PCR技術中的應用
...+)的血清檢出率分別爲72.0%,臨牀用血未檢出,可以消除實驗室內的PCR產物污染。結論本法快速、簡便、特異性好、能排除假陽性。 關鍵詞尿嘧啶DNA糖基化酶HBVDNA熒光定量PCRPCR污染U-DNA模板 由於PCR技術高度敏感性,使PCR...
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影響結核桿菌PCR結果準確性的因素
...壁完全破壞,同時也未去除Taq酶抑制因子,故影響了整個實驗的靈敏度和特異性;異硫氰酸胍法在提取結核桿菌DNA時,同樣不能使結核桿菌充分裂解,實驗結果要差些;鹼裂解直接煮沸法是臨牀上較常用的方法,簡便價廉,靈敏度...
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手製PCR不再是夢想
...動力學的基本原理,成功研製出了一種既便宜又有效的PCR實驗裝置。基因擴增儀(PCR)是你實驗室裏最昂貴的儀器設備,還記得那樣的時候麼?這種情況以後可能就不會發生了;即使情況不變的話,仍然會有像百戰天龍這部電影中...
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無創產前診斷技術之“哼哈二將”
...染色體的非整倍性疾病。本期推薦由香港中文大學DennisLo實驗室的AllenChan教授撰寫的綜述,介紹數字PCR和NGS(深度測序對每個DNA分子進行序列讀取,當然也可以看成是一種核酸層面的計數技術)這兩種DNA分子計數技術在NIPT方面的...
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FDA緊急批准:羅氏rRT-PCR技術用於埃博拉病毒測試
...氏控股獨家經營,可在3個小時內出結果,但只能由特定實驗室在有限的時間段裏探測埃博拉病毒。rRT-PCR技術可與羅氏LightCycler480或COBASZ480儀器配套使用,是一項已被化學發光法高複雜性實驗室或其他有資格的非美國實驗室使用...
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RT-PCR技術概述
...PCR系統可得到滿意結果。 用於反轉錄的引物可視實驗的具體情況選擇隨機引物、OligodT及基因特異性引物中的一種。對於短的不具有髮卡結構的真核細胞mRNA,三種都可。 RT-PCR引物的選擇 隨機引物適用於長的或具...
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蛋白免疫印跡和熒光-PCR診斷早期先天梅毒研究
...光定量聚合酶鏈反應(FQ-PCR)和血清IgM抗體蛋白免疫印跡實驗(serumIgMwesternblot,IgM-WB)在新生兒先天梅毒早期診斷中的作用。方法在知情同意的情況下,選取34例梅毒孕婦及其新生兒和40例非梅毒對照孕婦及其新生兒,分別給予...
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沙眼衣原體實驗診斷技術進展
...。培養法的特異性爲100%,但敏感性一般低於100%,且各個實驗室操作步驟有所不同,沒有標準化,這可能有助於解釋對同一種非培養方法的不同評價。組織細胞培養法是診斷Ct感染的“金標準”[4],但是由於分離培養操作複雜...
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沙眼衣原體感染的實驗室診斷
...引起了全世界對其進行廣泛深入的研究[1]。 目前實驗室診斷方法基本上可分爲細胞生物學檢測方法、分子生物學檢測方法和免疫學檢測方法。 1細胞生物學檢測方法 1.1塗片鏡檢法CT寄生於柱狀上皮細胞內形成包涵...
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雙抗夾心免疫PCR法檢測人促甲狀腺激素(TSH)
...13~1×10-16mol/Lhumannormalserum2.2IM-PCR檢測TSH各試劑參考用量實驗確定的各試劑的最佳濃度爲:單抗:0.08μg/ml;生物素化多抗:40μg/ml;親和素:0.1×10-3μg/ml;生物素化DNA:0.5×10-3μg/ml。 2.3IM-PCR反應條件調整各步反應時...
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補體C3基因敲除小鼠基因型鑑定的PCR條件優化
...基因敲除小鼠(geneknockoutmouse)是利用基因敲除技術使正常實驗小鼠的基因組特定位點上目的基因失活,經過繁殖篩選後所得到目的基因表達缺陷小鼠,是研究被敲除的目的基因的理想實驗材料[13]。爲了獲得可靠的動物模型,基因敲...
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由普通PCR向快速PCR的革命—BioDev
...材和特殊試劑盒,無需添加儀器和設備,也不會影響下游實驗。FasterTaq延伸速度明顯快於普通Taq酶。FasterTaq(SF/GF-Taq)在相同反應體系中擴增5kb片段,94℃20s,55℃2s,25個循環,延伸時間見圖所示。當延伸時間縮短至1m30s時,只...
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PCR-SSCP技術
...力工具.但這些方法操作比較繁瑣,侷限性較大,或要求實驗條件高,不適合一般臨牀實驗室使用.1989年問世的PCR-SSCP(下文稱SSCP)作爲檢測基因突變的方法,經不斷地改進和完善,更爲簡便、快速、靈敏,不但用於檢測基因點突變...
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乙型肝炎的實驗室診斷及質量控制
...治工作。衛生部計劃在未來3~4年內逐步建立全國乙型肝炎實驗室檢測網絡,制定《全國乙型肝炎實驗室檢測工作技術規範》,加強實驗室網絡人員培訓,提高乙型肝炎的實驗室診斷水平。以下就目前我國開展的乙型肝炎實驗室診斷技...
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結核分枝桿菌熒光定量PCR檢測方法的建立與應用
...100V,時間1h。ABI3130基因分析儀序列分析。 1.8特異性實驗 分別用陰性痰標本提取物25份和金黃色葡萄球菌DNA提取物、肺炎鏈球菌DNA提取物、肺炎克雷伯桿菌DNA提取物共20份爲對照模板進行Taq-man探針進行實時PCR檢測。 1.9...
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艾滋病的實驗室檢查
對艾滋病病人的特殊實驗室檢查包括針對HIV感染的檢測和感染者及感染病毒狀態的檢查。針對HIV感染的檢測包括對病毒及其成分的檢測以及病毒感染後機體特異性的反應物(抗體、特異性免疫細胞等)的測定,對感染者及病毒狀態...
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檢測HBVDNA/Ig-雙特異性循環免疫複合物的免疫捕捉法PCR①
...學生物系廈門大學細胞生物學與腫瘤細胞工程教育部重點實驗室 廈門 361005);彭宣憲(廈門大學生物系廈門大學細胞生物學與腫瘤細胞工程教育部重點實驗室 廈門 361005);柳 瓏(廈門大學生物系廈門大學細胞生物學與腫瘤...
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熒光定量PCR技術在女性泌尿生殖系感染中的應用
...及反應前熒光量,A1爲PCR反應後熒光量。計算AX=A1-A0判定實驗的有效性。將陽性對照管的AX稱爲N,定量陽性質控管(102基因拷貝/μl)的AX稱爲P1。在實驗有效的前提下,樣品AXN+4/5x(P1-N)判爲陽性,否則爲陰性。以定量陽性質控管...
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血紅蛋白和肝素對FQ-PCR檢測HBVDNA結果的影響
...法去除血紅蛋白和肝素的能力進行評價,旨在建立和完善實驗室的標本採集和處理程序。 1材料與方法 1.1儀器與試劑iCycler熒光定量PCR儀來自美國BIO-RAD公司;HBVDNA熒光定量PCR試劑盒購自深圳匹基基因診斷技術有限公司,試...
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SYBRGreenI熒光PCR檢測登革熱病毒基因方法的建立
...結果標準毒株的擴增結果與預期結果相同,測序結果顯示實驗結果序列與標準株序列一致。實驗的靈敏性特異性和重複都較高。結論SYBRGreenI熒光PCR檢測登革熱病毒的方法是一個快速、準確檢測登革熱的方法,但它更適用於早期傳染...
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第三節 基因擴增技術(PCR)
... 混勻後,離心15s使反應成分集於管底。以上步驟僅在實驗研究用,現在商品化試劑已將dNTP、10×PCR緩衝液,引物,ddH2O混合在一起,反應體積爲20-25μl,只要試驗人員加入處理好的樣品就可以了。 (2)加石蠟油50-100μl於...
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mRNA差別顯示技術(DDRT-PCR)
...物對,經計算機同源性分析表明同樣能覆蓋全部mRNA,使實驗簡化,同時由於引物變長,使cDNA擴增更爲有效。有的實驗室採用把Bakman公司的kit,其引物5′端爲26bp,3′端爲31bp,並加上了T3和T7兩端的測序引物,由儀器切割差異條...
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熒光PCR檢測尿中結核分枝桿菌的意義
...的非典型性腎結核的診斷,在臨牀有一定困難[1]。在實驗室檢測中,結核病患者的細菌學檢查,是確定結核病診斷和化療方案的重要依據[2]。但由於結核菌的遺傳特性決定的生長週期長,致使常規細菌學檢查方法存在着靈...
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差異基因研究技術及其應用
...基因。 4消減雜交法(SH) 經典的消減雜交法是將實驗組mRNA(或cDNA)與對照組cDNA(或mRNA)雜交,去除雜交體和未雜交上的對照組成分(cDNA或mRNA),得到實驗組獨有的cDNA或mRNA,這些基因即爲差異表達基因。爲克服傳統...
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STR-PCR技術監測造血幹細胞移植後狀態
...判斷疾病復發及臨牀復發前給予干預治療的重要依據。本實驗結果顯示病例1和病例2完爲HLA全相合,移植後呈全植入狀態,患者移植後造血重建,爲完全供者型,受者自身血細胞的基因消失,病例3爲HLA半相合,雖然臨牀上有緩解...
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應用PCR法快速鑑定臨牀體液標本中致病真菌
...養僅獲得菌屬的鑑定,要鑑定到菌種尚需經過複雜的生化實驗和免疫學實驗,而大多數菌種,特別是絲狀菌只有通過有經驗的技術人員才能識別。因此,我們藉助於PCR快速鑑定臨牀體液標本中的致病真菌,可明顯縮短檢測時間,...
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Transgenomic公司推出癌症基因檢測突破性PCR技術
...術,該項突破性癌症基因檢測技術使用已安裝在世界各地實驗室的標準測序設備,將無與倫比的敏感性和完整的DNA突變檢測巧妙的結合於一體。據悉,該項技術的推出恰逢2012美國臨牀腫瘤學會的年度會議。 據瞭解,ICECOLD-PCR...