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第二節 DNA的變性與復性
第二節 DNA的變性與復性 一、DNA變性 DNA變性是指雙螺旋之間氫鍵斷裂,雙螺旋解開,形成單鏈無規則線團,因而發生性質改變(如粘度下降,沉降速度增加,浮力上升,紫外吸收增加等),稱爲DNA變性。加熱、改變DNA溶...
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2-2-6核酸的變性和復性
DNA的變性DNA的復性核酸分子雜交 變性(denaturation)和復性(renaturation)是雙鏈核酸分子的二個重要物理特性。也是核酸研究中經常引用的術語。雙鏈DNA,RNA雙鏈區,DNA:RNA雜種雙鏈(hybridduplex)以及其它異源雙鏈核酸分子(...
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第三節 DNA的二級結構與功能
...終止處常常會出現雙重終止密碼子。 (四)DNA的變性、復性與分子雜交 DNA雙螺旋結構模型,不僅與其生物功能有密切關係,還能解釋DNA的重要特性棗變性與復性,這對於深入瞭解DNA分子結構與功能的關係又有重要意義。 ...
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影響結核桿菌PCR結果準確性的因素
...範化、標準化是十分必要的。其中實驗條件變化最大的有復性溫度、循環次數、標本用量和循環各等溫點保持時間選擇等,並且這些條件隨擴增產物不同有一定差異。復性溫度與PCR特異性和擴增效果有密切關係:溫度高低會影響...
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第十八章 診斷分子生物學基本技術--第一節 概述
...對形成雙鏈,形成的雙鏈與變性前的結構完全相同,稱爲復性。解鏈的DNA溶液在260nm處吸光值A260增大,即核苷酸>單鏈DNA>雙鏈DNA,稱爲高色效應,反之爲低色效應。以50μg/ml爲例,A260分別爲:雙鏈DNA=1.00,單鏈DNA=1.34自由鹼...
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第一章 基因診斷與性傳播疾病--第一節 基因診斷的分子生物學基礎
...個核小體彼此相聯沿染色質纖維的縱軸列成一種串珠狀重復性結構。串珠狀核小體長鏈可進一步捲曲,形成螺旋筒結構。在形成染色單體時,螺旋筒再進一步捲曲、摺疊。人體每個細胞中長約1.7μm的DNA雙螺旋鏈,最終被壓縮8400...
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實時PCR檢測HSV2DNA的方法學評價及應用
...用FQPCR和ELISA法同時檢測,並進行比較;另對FQPCR從重復性、靈敏度、線性範圍、特異性幾方面進行方法學評價。結果對60份臨牀標本檢測,ELISA法的陽性率爲16.7%,FQPCR法的陽性率爲31.7%,明顯高於前者(P<0.05)。FQPCR法的...
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PCR反應條件的選擇
...或PCR產物完全變性,就會導致PCR失 敗。 ②退火(復性)溫度與時間:退火溫度是影響PCR特異性的較重要因素。變性後溫度快速冷卻至40℃~60℃,可使引物和模板發生結合。由於模板DNA比引物複雜得多,引物和模板之間的碰...
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第三節 基因擴增技術(PCR)
...。引物與互補DNA結合後,以靶DNA單鏈爲模板,經反鏈雜交復性(退火),在TaqDNA聚合酶的作用下以4種三磷酸脫氧核苷(dNTP)爲原料按5'到3'方向將引物延伸、自動合成新的DNA鏈、使DNA重新複製成雙鏈。然後又開始第二次循...
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腫瘤分子遺傳學研究方法進展
...行篩選擴增。在這一步PCR擴增反應中,只有那些自身得以復性的檢測DNA擴增子具有PCR引物的結合位點而被擴增,而自然復性的驅動DNA擴增子與那些兩種DNA形成的異源雙鏈DNA則不能被擴增,實際上在整個擴增過程中,驅動擴增子的...
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分子生物學試驗方法探討三-如何選擇凝膠
...質很適合在變性條件下做純化。變性純化後的蛋白質需要復性至蛋白的天然構象。Superdex75、QSepharoseFF和pheny1SepharoseFF分別被發現有助包涵體蛋白的復性。一般包涵體蛋白樣品的純度越高復性效果越好。SOURCE30RPC反相層析介質很適...
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結核分枝桿菌ERIC-PCR分型技術的建立
...心12min,取上清做爲PCR模板。 1.3PCR反應組成優化及重復性 爲了實驗的準確性和可重復性,分別從PCR反應的模板質量、Mg2+濃度、引物濃度、DNA聚合酶用量、dNTPs濃度幾個方面逐一對PCR反應進行了優化組合,以選擇最佳PCR組...
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蛋白復性(四)-淺談蛋白質摺疊的有關問題
...蛋白質摺疊研究中得到的規律推廣到體內,用變性蛋白的復性作爲新生肽段摺疊的模型,並認爲細胞中新合成的多肽鏈,不需要別的分子的幫助,不需要額外能量的補充,就應該能夠自發的摺疊而形成它的功能狀態。 1988年...
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質粒DNA的鹼裂解法提取與純化
...質與DNA發生變性,當加入中和液後,質粒DNA分子能夠迅速復性,呈溶解狀態,離心時留在上清中;蛋白質與染色體DNA不變性而呈絮狀,離心時可沉澱下來。 純化質粒DNA的方法通常是利用了質粒DNA相對較小及共價閉環兩個性質...
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腸球菌隨機擴增多態性DNA分型及應用研究
...是一種特異、敏感、簡便快速、分辨力強、分型率高、重復性好的分型方法。可有效地對腸球菌進行基因分型,並且腸球菌的RAPD分型與其耐藥性有一定關係。 【關鍵詞】腸球菌;隨機擴增多態性DNA;基因分型 Studyontypingofent...
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第二節 核酸分子雜交法
...子。同一個二聚體中的兩個分子在變性解離後重組合稱爲復性。利用兩條不同來源的多核苷酸鏈之間的互補性而使它們形成雜交體雙鏈叫核酸雜交。與核酸雜交技術相對應的另一項技術被稱爲探針技術,它是指利用標記分子對其...
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科學家從蛋殼化石中提取出巨型恐鳥DNA
...CharlotteOskam)和同事表示,蛋殼是一種具有良好遺傳物質恢復性的薄膜,在世界各地的化石沉積物中經常被發現,而他們從蛋殼中提取DNA樣本的研究在全球範圍內尚屬首例。研究結果刊登在英國《皇家學會會報B輯:生物科學》上...
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BPI23-Fcγ1重組融合蛋白在E.coli中的表達
...I23-Fcγ1重組蛋白,表達量約佔菌體蛋白總量的20%~30%;(5)復性後重組蛋白具有抗菌活性和結合蛋白A的作用。結論 pBV-BPI600-Fcγ1700重組表達載體構建成功;在E.coli中得到表達,獲得具有抗菌活性的BPI23-Fcγ1重組蛋白。Expressionofrecom...
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如何選擇凝膠
...介質很適合在變性條件下做純化。變性純化後的蛋白需要復性至蛋白的天然構象。Superdex75、QSepharoseFF和PhenylSepharoseFF分別被發現有助包涵體蛋白的復性。一般包涵體蛋白樣品的純度越高,復性效果越好。SOURCE30RPC反相層析介質很...
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如何選擇凝膠
...介質很適合在變性條件下做純化。變性純化後的蛋白需要復性至蛋白的天然構象。Superdex75、QSepharoseFF和PhenylSepharoseFF分別被發現有助包涵體蛋白的復性。一般包涵體蛋白樣品的純度越高,復性效果越好。SOURCE30RPC反相層析介質很...
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科學家發現垃圾DNA對基因調控的作用
科學家早已知道,有些“垃圾”DNA(重復性DNA片段)能夠進化成外顯子(exon),作爲高等有機體內編碼蛋白基因的構成成分。美國科學家近日發現證據表明,大量來自垃圾DNA的外顯子在基因調控中發揮着作用。相關論文10月17日...
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2-1-6真核生物染色體基因組的結構和功能
...許多DNA序列並不轉錄成mRNA用於指導蛋白質的合成。DNA的復性動力學研究發現這些非編碼區往往都是一些大量的重複序列,這些重複序列或集中成簇,或分散在基因之間。在基因內部也有許多能轉錄但不翻譯的間隔序列(內含子...
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人絨毛膜促性腺激素β亞基在大腸桿菌中的表達
...詞:人絨毛膜促性腺激素β亞基;序列分析;基因表達;復性 摘 要 目的:以該室克隆的PCRⅡ/hCGβ載體爲模板,亞克隆到表達載體PG5中使hCGβ基因在大腸桿菌中進行高效表達。方法:改變部分hCGβ序列,得到重組PG5/hCGβ載體...
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蛋白復性(五)-蛋白質復性
關鍵詞:蛋白質復性;環糊精;分子伴侶 重組DNA技術爲大規模生產目標蛋白質提供了嶄新的途徑。但人們在分離純化基因工程表達產物時卻遇到了意想不到的困難:很多利用大腸桿菌爲宿主細胞的外源基因表達產物如尿激酶...
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四維雜交技術推動基因檢測進入臨牀時代
...統核酸分子雜交技術,一改傳統DNA檢測技術檢測結果再重復性差的弱點,做到了被測物在不同時間、不同地點、不同操作者以及不同種類反應之間的再重復性,從而實現了臨牀應用反應體系與實驗室檢測關鍵參數的反應體系的一...
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昆蟲體內細菌可糾正基因缺陷
...內的細菌在將DNA翻譯成蛋白的過程中,可以糾正基因的重復性缺陷,進而使蛋白髮揮正常功能,該結果發表在近期《美國國家科學院學報》上。 包括蚜蟲、螞蟻及舌蠅等多種昆蟲,均需依靠體內特定的細菌才能生存,這些細...
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PCR-SSCP技術
...:①PCR擴增靶DNA;②將特異的PCR擴增產物變性,而後快速復性,使之成爲具有一定空間結構的單鏈DNA分子;③將適量的單鏈DNA進行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳;④最後通過放射性自顯影、銀染或溴化乙錠顯色分析結果.若發現單鏈DNA...
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2-2生物化學與分子生物學技術
... 分子雜交技術(molecularhybridization)是在研究DNA分子復性變化基礎上發展起來的一種技術。其原理是,具有互補核苷酸序列的兩條單鏈核苷酸分子片段,在適當條件下,通過氫鍵結合,形成DNA-DNA,DNA-RNA或RNA-RNA雜交的雙鏈分...
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程遠輝,張興:分子標記技術在中藥鑑定中的應用
...點是共顯性,可以區別純合和雜合基因型,而且穩定、重復性強,目前在某些生物體中開發的RFLP的探針已經遍及整個基因組。但是RFLP存在較多缺點,如對DNA需要量較大,過程較爲複雜,所需的放射性探針對人體危害較大。而分...
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23株靈芝栽培菌種的DNA指紋鑑別
...增反應程序爲:92℃預變性5min,35個循環的92℃變性1min、35℃復性1min、72℃延伸2min。最後,72℃延伸10min,終止反應。 1.4.3瓊脂糖凝膠電泳取上述PCR產物8μl點樣於1.4%瓊脂糖凝膠上,於0.5×TBE緩衝液中5V/cm電泳。EB染色在Bio-Rad凝膠成像...