原核表達活性內源性血管生成抑制劑canstatin蛋白
...n蛋白,並驗證其生物學活性。研究者利用BamHⅠ和HindⅢ從重組質粒pUCm-T/canstatin上切下canstatin基因,插入表達質粒pET-22b(+)相應位點,轉化E.coliBL21。異丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)誘導重組蛋白表達,SDS-PAGE電泳分析蛋白表達情況.超...
行業資訊;臨牀快報;藥理學Megalin基因片段(3189-4169)的克隆及其表達
...片段Megalin基因3189-4169,再與原核表達質粒pTrcHisA結合構建重組質粒,然後將重組質粒轉入TOP10細菌誘導表達融合蛋白,最後用Western-Blot檢測表達的融合蛋白。結果(1)RT-PCR獲得的目的片段大小爲1kb,測序證實爲Megalin基因3189-4169;...
醫源資料庫;在線期刊;中華現代臨牀醫學雜誌;2006年第4卷第8期嗜酸乳桿菌推定的β半乳糖苷酶基因在大腸桿菌中的功能性表達
...接酶連接,再將連接產物電轉化入宿主菌株。共構建3個重組質粒(見圖1):(a)是pET22blacZH,由P1和P2擴增的片斷和pET22b連接構成,lacZ基因置於T7啓動子控制下,5′端帶有果膠酶信號肽序列,3′端帶有HisTag.轉化Rosetta...
醫源資料庫;在線期刊;成都醫學院學報;2009年第4卷第2期淋病奈瑟菌mtrC膜蛋白基因的克隆和表達
...建重組表達質粒pET-mtrC。通過質粒雙酶切和DNA測序證實該重組質粒構建正確。重組質粒轉化人大腸桿菌DE3中,經IPTG誘導表達蛋白。結果經酶切鑑定和測序分析,質粒構建正確,核苷酸序列與GeneBank(U14993)公佈的序列相比較,同源...
行業資訊;臨牀快報;遺傳與基因組BACE1的原核表達純化及活性鑑定
...CR技術擴增獲得全長BACE1,並構建了BACE1功能區的原核表達重組質粒pMALc2-BACE1。重組質粒轉化至E.coliJM109,以IPTG誘導MBP-BACE1融合蛋白的表達。經AmyloseResin親和層析及陰離子交換FPLC純化MBP-BACE1後,通過Xa因子切割去除MBP標籤以獲取BAC...
合作平臺;在線期刊;中華實用醫藥雜誌;2005年第5卷第4期;論著RNA干擾對人瘢痕疙瘩成纖維細胞TGFβ1刺激後膠原合成的影響
...實驗採用抑制效率最高的靶序列進行轉染。轉染細胞分爲重組質粒組和空質粒組,每組各5份細胞樣本。1.2.33H脯氨酸(3Hpro)滲入法檢測膠原蛋白將3Hpro原液配成20×稀釋的使用液,在每組細胞中加入20μL,37℃、5%CO2培...
醫源資料庫;在線期刊;局解手術學雜誌;2009年第18卷第2期人組織激肽釋放酶單克隆抗體的製備與初步鑑定(基金項目)
...瘤細胞株。方法將KLK1cDNA克隆入真核表達質粒,用獲得的重組質粒轉染COS-1細胞,經間接免疫熒光試驗證明,上述單克隆抗體能與轉染細胞發生特異反應。結果經用方法證明,本研究研製的單克隆抗體還能與雞輸卵管表達的重組hK...
合作平臺;在線期刊;中華醫藥雜誌;2004年第4卷第4期;論著跨膜型CD59分子的構建及其在小鼠NIH3T3和EL-4細胞表達的研究
...DNA序列分析pGEM-TEasy是可以直接測序的載體,因此我們以重組質粒爲模板進行測序,得到了克隆片段的DNA序列(圖3),經分析發現:由於引物合成的錯誤,原設計的3端XbaⅠ位點消失。但兩個片段的連接部位序列正確,閱讀框完...
合作平臺;醫學論文;臨牀醫學與專科論文;檢驗醫學NCLs致病相關基因CLN8真核表達載體的構建及檢測*
...段,與同樣酶切的PEF-Flag載體連接構建成質粒PEF-Flag-CLN8。重組質粒進行限制性酶切、測序鑑定後,無水乙醇濃縮沉澱,並用紫外分光光度儀定量待轉錄用。1.2.2重組質粒轉染Hela細胞Hela細胞用DMEM培養基接種於六孔板中培養18~24h;分...
醫源資料庫;在線期刊;中華實用醫藥雜誌;2007年第7卷第1期凝血酶調節蛋白基因對臍靜脈內皮細胞抗凝功能的調控
...粒轉染率約爲10%,TMmRNA和TM蛋白的表達強度都有明顯提高.重組質粒轉染組、空載質粒組及未轉染組PC反應液中活化蛋白C(activatedproteinC,APC)的含量分別是(2.80±0.43)μg/ml、(0.75±0.08)μg/ml、(0.85±0.11)μg/ml.APTT值在重組質粒轉染組、空載...
行業資訊;臨牀快報;遺傳與基因組