人鹼性成纖維細胞生長因子基因的克隆、表達及生物活性分析
...,構建成pcDNA/b。應用脂質體介導的基因轉移技術將重組質粒體外轉染至人臍帶靜脈內皮細胞(HUVEC)。結果重組質粒轉染能明顯促進內皮細胞的分裂增殖。進一步將重組質粒通過脂質體介導,體外轉染至人腎細胞293細胞系進行表...
合作平臺;在線期刊;中華中西醫雜誌;2004年第5卷第13期;論著反覆凍融對熒光實時定量PCR質粒標準品的影響研究
【摘要】1.0×104拷貝/μl的高中濃度的質粒標準品可以耐受21次以內反覆凍融,低於1.0×104拷貝/μl的質粒標準品反覆凍融後量值變化較大,臨牀使用的試劑盒所配的低濃度標準品應避免反覆凍融。【關鍵詞】實時定量PCR;質粒DNA標準...
醫源資料庫;在線期刊;中華中西醫雜誌;2009年第10卷第10期熒光定量RT-PCR快速檢測手足口病病原研究
...,設計一對共引物及探針,建立、優化反應體系後,構建質粒標準品,利用10倍稀釋法建立相對定量標準曲線,根據TCID50倍比稀釋,建立靈敏度曲線。特異性檢驗後利用臨牀標本與傳統的RT-PCR法進行比較。結果定量標準曲線的靈...
醫源資料庫;在線期刊;中國熱帶醫學雜誌;2008年第8卷第10期以Bacmid-桿狀病毒-昆蟲細胞系統表達人FGF-9①
...腦膠質瘤組織獲取人FGF-9全編碼區cDNA,將其克隆入pCRTMⅡ質粒及pYEX4T-1真核表達質粒,經DNA自動測序儀進行DNA序列測定。將人FGF-9cDNA定向克隆入pFastBac質粒,進一步將其轉座入Bacmid中,在昆蟲細胞Sf9中進行表達,採用SDS-PAGE對錶達產...
合作平臺;醫學論文;臨牀醫學與專科論文;檢驗醫學丙型肝炎病毒Core基因重組表達載體Pet32a-Core的構建
...似丙型肝炎患者的血清標本採自深圳某傳染病醫院;Pet32a質粒及BL21大腸桿菌購自Promega公司;抗HCV-IgGELISA試劑盒購自上海科華生物技術有限公司,RNA提取試劑盒用RocheHighPureviralRNAkit,RNA擴增用TaKaRaOneStepRNAPCRKit,AMV逆轉錄酶、Taq酶...
醫源資料庫;在線期刊;中國熱帶醫學雜誌;2008年第8卷第4期大鼠MHC-Ⅰ類基因cDNA的克隆
...獲得了MHC-ⅠcDNA。 1材料與方法 1.1材料E.coliDH5a和質粒pBV220爲華西醫科大學鉤體研究室伍衛華教授惠贈。總RNA提取試劑盒(QIAGen公司),RT-PCR及PCR試劑盒(GibcoBRL),EcoRI,BamHI,PruI,SspI,PstI內切酶及DNAMarker(華美公司)...
合作平臺;醫學論文;臨牀醫學與專科論文;檢驗醫學HCV核心區基因的截短及其表達
...核心抗原。方法設計一對特異性引物,以含HCV全長基因的質粒pBRTM/HCV1-3011爲模板,擴增出HCV截短的核心抗原(1-120aa)的基因,克隆於表達載體pGEX-4T3,並轉化於大腸桿菌BL21,IPTG誘導HCV截短的核心抗原的表達,表達產物經過SDS-PAGE,...
醫源資料庫;在線期刊;中華醫藥雜誌;2006年第6卷第11期大鼠骨骺幹細胞的分離鑑定及其永生化細胞株的構建
...用電穿孔轉染技術將含有猿腎病毒40大T抗原基因(SV40Tag)的質粒pCMVSV40T/PUR轉染骨骺幹細胞,經嘌呤黴素篩選,抗性克隆擴大培養。應用FGFR-3抗體和PCNA抗體進行免疫細胞化學染色,觀察細胞的形態及其生長狀況並繪製細胞生長曲...
醫源資料庫;在線期刊;中國矯形外科雜誌;2007年第15卷第16期登革病毒E蛋白區段基因克隆及高效表達
...表位及免疫功能的研究奠定基礎。方法 以含有D2VE區的質粒p30.VD2爲模板,PCR擴增了編碼D2VE蛋白308~468aa區段的基因片段,以pMY爲表達載體,構建了表達質粒pDE1,並用酶切法使之缺失跨膜區疏水aa較多的編碼序列,又構建了表達質...
合作平臺;醫學論文;臨牀醫學與專科論文;檢驗醫學內切酶的特性、酶解和瓊脂糖凝膠電泳
...帶呈現出紅色熒光,易於檢測。可以檢測10ng的DNA。 質粒pCMV-Myc-T10NEB標準分子量片段(1kbDNALadder)EcoR1和Xho1核酸內切酶(Takara)EcoR1和Xho1酶解緩衝液(10×Hbuffer)瓊脂糖TBE或TAE緩衝液(10×)溴化乙啶染色液(10mg/ml)上樣液(6×):0.25%溴酚...
醫藥經濟;生物技術;實驗技術;生化與分子技術