3 概述
人胰島素原（proinsulin）是胰島素的前體物質，由胰島素和C肽組成，具有雙重免疫活性，既可與胰島素抗抗體結合，又可與C肽抗體結合。胰島素原由胰島β細胞合成和分泌，主要在腎臟分解代謝。生理情況下，只有極少量的胰島素原釋放入血，在病理情況下，胰島β細胞釋放胰島素原增多，血中胰島素原水平升高。
4 胰島素原的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 胰島素原的測定原理
將一定量的標記胰島素、抗胰島素抗抗抗體和各種已知量的胰島素標準品或血漿樣品相混合，使之發生特異性結合。然後用葡聚糖炭粉分離遊離胰島素和結合的胰島素，測定葡聚糖炭粉的放射性。葡聚糖炭粉吸附的放射性隨標本中胰島素含量增加而增加。
4.4 試劑
（1）標記緩衝液（0.5mol/L磷酸鉀緩衝液，pH值7.5）。
（2）測定緩衝液（0.05mol/L磷酸鉀緩衝液，pH值7.5，含0.1%牛血清白蛋白和0.1%疊氮鈉）。
（3）柱飽和緩衝液（0.05mol/L磷酸鉀緩衝液，pH值7.5，含2%牛血清白蛋白和0.1%疊氮鈉）。
（4）0.25%氯胺T：氯胺T 25mg溶於標記緩衝液10ml。
（5）0.25%偏焦亞硫酸鈉：偏焦亞硫酸鈉25mg溶於0.05mol/L磷酸緩衝液10ml（pH值7.5）中。
（7）100μg/L胰島素溶液：以胰島素1mg溶於0.01mol/L鹽酸0.5ml中，使胰島素溶解，然後以標記緩衝液補至10ml。每管20μl分裝後，貯存於－20℃。
（8）胰島素標準液：以100mIU/L倍比稀釋，採用6個標準，即0，1.5625，3.125，6.25，12.5，25mIU/L。
（9）抗胰島素血清：以上述胰島素150μg懸浮手水0.5ml，然後加等量的福氏完全佐劑乳化，多點注射於豚鼠背部皮下，然後每隔1月加強免疫，共2～3次，每次75μg。每次注射後8～12天內可檢測血清中抗體滴度。
（10）葡聚糖覆蓋的炭粉懸浮液：活性炭5g懸浮於測定緩衝液100ml，葡聚糖（T-70，或者T-250）0.5g溶於測定緩衝液100ml，然後將兩種溶液混和。
（12）葡聚糖凝膠G-50柱（10×0.9cm）：預先以柱飽和緩衝液浸洗過夜，然後以測定緩衝液平衡。
4.5 操作方法
（1）胰島素碘標記物製備和純化：
①取Na125I 3.7×107Bq置於含胰島素2μg（20μl）的反應管內。
②加氯胺T溶液10μl。
③立即蓋緊，輕敲小管使試劑快速混和。
④12～15s後，加偏焦亞硫酸鈉溶液25μl（62.5μg）。
⑤把管內容物加至Sephadex G-50柱上，用測定緩衝液洗滌，每管0.5ml收集45管，再用γ計數器計數。第一峯爲125I標記的活性胰島素，第二峯是沒有結合的放射性碘。
（2）標記激素的免疫反應性估價：取第一峯收集物，以測定緩衝液稀釋至5000cpm/0.1ml，取0.1ml該標記物於小試管中，加入過量抗血清（0.1ml）及0.1ml測定緩衝液，在4℃溫育24h，然後加1ml葡聚糖活性炭懸浮液，在適當攪拌後，試管在4℃靜止15min，然後再離心15min，丟棄上清液，計數沉澱，沉澱計數應少於加入量的5%，如計數增加，指示125I-胰島素破壞。
（3）抗血清滴定：將抗血清系列稀釋，從1∶320000至1∶10 000測定時，在小試管中加0.1ml測定緩衝液，0.1ml稀釋的抗血清，0.1ml稀釋的標記胰島素。在4℃溫育20h，然後加1ml葡聚糖活性炭，適當攪拌後，在4℃溫育15min後，再離心15min。丟棄上清液，測量沉澱物放射性計數，計數以加入量（F/T%）的35%～60%爲合適的抗體稀釋度。
（4）胰島素測定：標準管與測定管做雙份，具體操作如下表（表1）：
4.6 正常值
各實驗室依具體情況確定。
放射免疫法：＜0.2μg/L。
4.7 化驗結果臨牀意義
（1）糖尿病患者血漿胰島胰島素胰島素原水平明顯升高。1型糖尿病由於胰島胰島素合成和分泌極度下降，剛合成的胰島素原在未轉變爲胰島素的情況下即釋放入血，造成血漿胰島胰島素胰島素原升高。研究證明，部分表現爲高胰島素血癥的2型糖尿病患者其實爲高胰島素原血癥，是因爲胰島β細胞功能障礙，胰島素原分泌增多所致。
（2）胰島β細胞瘤、家族性高胰島素血癥患者血漿胰島胰島素胰島素原水平明顯升高。
（3）慢性腎功能不全時，胰島素原的分解代謝降低，可致血漿胰島胰島素胰島素原升高；甲亢時亦可出現血漿胰島胰島素胰島素原水平升高。
4.8 附註
（1）在操作過程中加量務必精確。
（2）碘化鉀、氯胺T及偏焦亞硫酸鈉溶液在使用前幾分鐘配製。其他溶液可於－20℃貯存。
（3）加入葡聚糖活性炭後，在4℃靜置15min，不要延長時間或升高溫度，否則會導致沉澱計數增加。
（4）如市上有胰島素放免試劑盒出售，可省略抗胰島素抗血清製備，胰島素標記等步驟，操作方法須嚴格按照試劑盒所附介紹進行。