4 胰島素抗體的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 胰島素抗體的測定原理
4.3.1 （1）酶聯免疫吸附法
以聚苯乙烯反應板爲載體，用胰島素-卵清蛋白交聯物爲包被抗原，加待測血清後，如待測血清中有抗胰島素抗抗抗體（antiinsulin antibody，A-IAb），則與包被抗原結合，再與隨後加入的酶標記葡萄球菌A蛋白反應，在酶底物作用下顯色，顯色強度可反映抗胰島素抗抗抗體水平。
4.3.2 （2）免疫酶斑點法
用硝酸纖維素膜爲載體，胰島素-卵清蛋白交聯物爲包被抗原，如待測血清中有抗胰島素抗抗抗體，則與包被抗原結合，再與HRP-SPA反應，在酶底物作用下顯色。如檢樣中無抗胰島素抗抗抗體，則包被抗原處不呈色。
4.4 試劑
4.4.1 （1）酶聯免疫吸附法
①胰島素-卵清蛋白交聯物：取普通豬胰島素注射液（40u/ml＝1.6mg/ml，市售商品）5ml加3ml pH8.6，0.06mol/L巴比妥緩衝液（內含卵清蛋白160mg），混勻後，滴加0.25%戊二醛0.24ml，室溫攪拌1h。分裝，－20℃保存，用作包被抗原。
②豚鼠抗胰島毒抗體：按上法制備胰島素-牛血清白蛋白交聯物，加等量福氏完全佐劑充分乳化，交替注射豚鼠（體重400～500g/只）的背部，兩後肢肌肉內等處，每隻豚鼠每次注射胰島素量約20u，10天注射1次，免疫4次後，抽心血觀察血清效價，一般免疫5～6次後用不加佐劑的胰島素一片血清白蛋白作加強注射3天后，抽血，分離血清，－20℃保存備用，作爲陽性對照。
③辣根過氧化物酶標記的葡萄球菌A蛋白（HRP-SPA），最適稀釋度預試選定。
4.4.2 （2）免疫酶斑點法
①胰島素-卵清蛋白交聯物、豚鼠抗胰島素抗抗抗體製備參見酶聯免疫吸附法。
②HRP-SPA，最適稀釋度預試選定。
④底物溶液：3，3＇-二氨基聯苯胺四鹽酸鹽（DAB）5mg，用0.2ml二甲基亞碸溶解後，補加pH7.4，0.01mol/L PBS10ml，30%H2O2 0.05ml，使用前新鮮配製。
4.5 操作方法
4.5.1 （1）酶聯免疫吸附法
將胰島素-卵清蛋白用包被液稀釋至20μg/ml，包被聚苯乙烯反應板微孔，每孔100μl，4℃過夜。洗滌液洗3次，每次3min，用pH7.4，0.01mol/L PBS（內含15%小牛血清）封閉，43℃ 1h。同上法洗後加待測血清（1∶100）或陰性、陽性對照，每孔100μl，43℃ 1h（37℃ 2h）。同上法洗後加最適稀釋度的HRP-SPA，每孔100μl，45℃ 1h（37℃ 2h）。同上法洗後加底物（OPD-H2O2）溶液，每孔100μl，37℃ 10min顯色。用2mol/L H4SO4終止反應。
4.5.2 （2）免疫酶斑點法
將NC膜劃成5mm×5mm的小方格，浸於pH7.4，0.01mol/L PBS中30min，濾紙吸乾。取2μl胰島素-卵清蛋白交聯物點樣於小方格中央，室溫自然乾燥。用pH7.4，0.01mol/L PBS（內含卵清蛋白10.0g/L）封閉，45℃ 1h，濾紙吸乾。加待測血清2μl於抗原包被處，45℃ 30min後，用pH7.4，0.01mol/L PBS洗3次，每次3min，濾紙吸乾。將膜置於最適濃度HRP-SPA中，45℃ 30min，同上法洗後濾紙吸乾。浸於新配底物中5～10min，顯色後流水沖洗，終止反應。
4.6 正常值
陰性。
4.7 化驗結果臨牀意義
胰島素抗抗體對糖尿病和低血糖的診斷、鑑別診斷及治療具有非常重要的意義。
4.7.1 （1）1型糖尿病的早期發現
正常人羣如在血中發現胰島素抗抗體則很容易罹患1型糖尿病。胰島素自身抗體可能系β細胞破壞所產生，因此胰島素自身抗體的檢測可作爲自身免疫性β細胞損傷的標誌，可用於早期發現和預防1型糖尿病。
4.7.2 （2）診斷胰島素抵抗，指導糖尿病治療
血液中存在胰島素抗抗體是產生胰島素抵抗的重要原因，糖尿病患者在使用胰島素治療的過程中可因胰島素抗抗體的產生而出現胰島素抵抗，表現爲胰島素用量逐日增加但血糖控制並不理想。此時應檢測胰島素抗抗體，若出現陽性或滴度增高可作爲胰島素抵抗的客觀依據。換用單組分胰島素、高純度胰島素及停用胰島素、口服降糖藥或應用糖皮質激素皆有助於降低胰島素抗抗體的濃度，改善胰島素抵抗。
4.7.3 （3）胰島素自身免疫綜合徵
自Hirata等於1970年首次報告後，國內外報告逐年增多。胰島素自身免疫綜合徵（insulin autoimmune syndrome，IAS）的特徵爲嚴重低血糖、高胰島素血癥、胰島素抗抗體（IAA）陽性及從未接受外源性胰島素治療。IAS低血糖發作呈自限性，82%不經治療1年內自行緩解，但發作時多較嚴重且診斷困難。除對症治療外，應用腎上腺皮質激素可能有一定價值。遺傳易感性在IAS發生中可能起重要作用。
4.8 附註
胰島素依賴性糖尿病抗胰島細胞抗抗胰島細胞抗體陽性率爲20%～40%，活動期陽性率可達60%～70%；非胰島素依賴性糖尿病陽性率僅爲6.2%。因此，檢測抗胰島細胞抗體可區分2型糖尿病。