3 概述
乳酸脫氫酶（LDH或LD）是糖無氧酵解及糖異生的重要酶系之一，可催化丙酮酸與L-乳酸之間的還原與氧化反應，也可催化相關的α-酮酸。LDH廣泛存在於人體組織中，以心、腎、骨骼肌含量最高，肝、脾、胰和肺組織次之，各組織的細胞漿內該酶活力爲血清的500～1000倍，紅細胞內酶活性爲血清的100倍。LDH測定方法主要有比色法和連續監測法。
4 血清乳酸脫氫酶醫學檢查
4.1 分類
4.2 取材
4.3 原理
（1）比色法：LDH以NAD＋作氫的受體，催化乳酸脫氫，生成丙酮酸，後者與2，4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸二硝基苯腙，在鹼性溶液呈紅色，根據顏色深淺求出酶活性。
（2）連續監測法：LDH可催化L-乳酸生成丙酮酸，同時NAD＋還原成NADH，在340nm處吸光度的增高速率與酶活力成正比。
4.4 試劑
（1）比色法：
①底物緩衝液（含0.3mol/L乳酸鋰，pH8.8）：取乳酸鋰2.88g，二乙醇胺2.1g，加蒸餾水約80ml溶解，以1mol/L HCl調pH8.8，加水至100ml。
②11.3mmol/L輔酶Ⅰ（NAD）溶液：稱氧化型輔酶Ⅰ 15mg，溶於20ml蒸餾水中，冰箱保存可用2周。
③1mmol/L 2，4-二硝基苯肼（DNPH）溶液：稱取DNPH 200mg，加10mol/L HCl 100ml，溶後加水至1000ml，置棕色瓶內室溫保存。
④0.4mol/L NaOH溶液。
⑤1mmol/L丙酮酸標準液：稱取丙酮酸鈉（AR級）11.0mg，以底物緩衝液溶解並稀釋至100ml，臨用前配製。
（2）連續監測法：
①55mmol/L乳酸鋰Tris緩衝液：稱取乳酸鋰5.28g，Tris 6.68g，溶於800ml蒸餾水中，在37℃水浴箱中用1mol/L HCl調pH至8.9（約需46ml），加水至1000ml，冰箱保存。
②12mmol/L NAD溶液：稱取NAD 79.6mg，溶於10ml蒸餾水中，冰箱保存可用2周。
③基質應用液（含NAD 6mmol/L）：根據當天用量將上述NAD溶液和乳酸鉀Tris緩衝液等量混合即可。商品試劑盒按其說明溶解，恢復至室溫25℃使用。
4.5 操作方法
（1）比色法：按表1操作。
混勻，室溫放置5min後，在440nm波長，比色杯光徑1.0cm，蒸餾水調零點，讀取各管吸光度，以AU-AC之差值查標準曲線，求出LDH活力單位。
附註：
①乳酸鉀、乳酸鈉也可作爲LDH底物，但因其爲水溶液，含量不夠準確，且保存不當易產生酮酸類物質，抑制酶促反應。而乳酸鋰爲固體，穩定，易於稱量。
②除二乙醇胺緩衝液外，也可用Tris或焦磷酸緩衝液，避免了原金氏法中甘氨酸緩衝液對LDH的抑制作用，提高了陽性檢出率。
③比色應在5～15min內完成，否則吸光度降低。
④結果＞2500U時，可用生理鹽水稀釋標本後再測，其結果乘以稀釋倍數。
（2）連續監測法：各實驗室可根據本室生化自動儀型號及介紹操作。主要參數爲340nm波長，37℃，吸樣量500μl，連續監測時間60s，標本與試劑體積之比爲1∶50。
附註：
①標本勿溶血，當溶血達Hb 0.8g/L時，LDH活性可升高58%。
②標本於室溫（25℃）保存，2天內酶活性穩定，冰箱保存酶活性降低，－20℃過夜LDH3、LDH4則全部失活。
③用血清或肝素抗凝血漿測定結果滿意，草酸鹽可抑制LDH活性。
④復溶後溶液變濁或初始吸光度＞0.5應棄去。
⑤利用正逆雙向反應均可測定乳酸脫氫酶活性，但因反應溫度、底物和緩衝液濃度不同，其參考區間也有差異。以乳酸和NAD爲底物，在340nm監測吸光度增高速率爲正向反應，以LD-L表示；以丙酮酸和NADH爲底物，監測340nm吸光度下降速率爲逆向反應，以LD-P表示。正逆反應兩法相比，LD-L法的主要優點是：A.正向反應底物液的穩定性比逆向反應的穩定性大，前者冰箱可保存6個月以上，而後者僅幾天；B.速率反應的線性範圍（吸光度對監測時間t作圖）較寬；C.重複性比LD-P好。由於逆向反應速度比正向反應速度快，其參考值約爲LD-L的2倍。
4.6 正常值
（1）比色法：150～450U/L。
（2）連續監測法：男80～280U/L
女100～230U/L
4.7 臨牀意義
（1）心肌梗死：發病10～12h升高，24～48h達高峯，8～9天后恢復正常。與CK相比，雖然酶活性出現較遲，陽性率較低，但持續時間長，且活性增高的程度與心肌梗死的病情密切相關，梗死範圍越大，其酶活性越高。若LDH增高後恢復遲緩，或在病程中再次增高，提示梗死範圍擴大，預後不良。
（2）肝臟疾病：急性肝炎或慢性活動性肝炎LDH常顯著或中度升高。其敏感度略低於ALT。肝癌時LDH活性明顯升高，尤其是轉移性肝癌增高更顯著。可達1000U/L。
（3）血液病：白血病、巨幼紅細胞貧血、惡性淋巴瘤等LDH活性升高。
（4）其他：營養不良、橫紋肌損傷、胰腺炎、肺梗塞等LDH活性也升高。