3 概述
蛋白質等生物分子在緩衝液中帶負電荷或正電荷，在電場中向陽極或陰極運動，稱爲電泳（electmphomsis）。由於其等電點不同，分子大小、形狀和荷質比的不同，使不同蛋白質分子具有不同的電泳遷移率，在一定的支持介質中可藉以分離各種蛋白質。常用的電泳技術有：醋酸纖維素薄膜電泳、瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、免疫電泳等。血清蛋白電泳以醋酸纖維素薄膜應用最爲普遍。
5 血清蛋白電泳的醫學檢查
5.1 檢查名稱
5.2 分類
5.3 取材
5.4 血清蛋白電泳的測定原理
血清中各種蛋白質都有其特有的等電點，各種蛋白質在各自的等電點時呈電中性狀態，它的分子所帶正電荷與所帶負電荷量相等。將蛋白質置於pH比值等電點較高的緩衝液中，它們將形成帶負電荷的質點，在電場中均向正極泳動。由於血清蛋白質的等電點不同，帶電荷的量多少差異，蛋白質分子量大小也不同，所以在同一電場中泳動速度也不同。蛋白質分子越小帶電越多，移動速度越快；分子越大而帶電越少，移動速度越慢。按其泳動速度可以分出以下的主要區帶，從正極端起，依次爲白蛋白、α1球蛋白和α2球蛋白，β球蛋白和γ球蛋白5條區帶。
5.5 試劑
（1）巴比妥-巴比妥鈉緩衝液（pH8.6±0.1、μ＝0.06）：以巴比妥2.21g、巴比妥鈉12.36g於500ml蒸餾水中，加熱溶解，待冷卻至室溫後加蒸餾水至1000ml。
（2）染色液：
①麗春紅S染色液：麗春紅9.04g、三氯醋酸6g，用蒸餾水溶解，並稀釋至100ml。
②氨基黑10B染色液：氨基黑10B 0.1g，溶於無水乙醇20ml中，加冰醋酸5ml甘油0.5ml使溶解。然後將磺柳酸2.5 g，溶於少量蒸餾水中，加入前液，再以蒸餾水補足至100ml。
（3）漂洗液：
②甲醇45ml，冰醋酸5ml和蒸餾水50ml混勻。用於氨基黑10B染色的漂洗。
（4）透明液：檸檬酸（C6H5Na3O7·2H2O）21g和N-甲基-吡咯烷酮150g，用蒸餾水溶解，並稀釋到500ml。亦可選用氫萘或液體石蠟透明。
（5）0.4mol/L氫氧化鈉溶液或0.1mol/L氫氧化鈉溶液。
5.6 操作方法
（1）將緩衝液加入電泳槽內，調節兩側槽內的緩衝液，使其處於同一平面。
（2）醋酸纖維素薄膜的準備：取醋酸纖維素薄膜（2cm×8cm）在毛面的一端（負極側）1.5cm處用鉛筆輕劃一橫線，做點樣標記。編號，並標明正、負極後，將薄膜置於巴比妥-巴比妥鈉緩衝液中浸泡，待充分浸透後（一般爲20min）取出，夾於潔淨濾紙中間吸去多餘的緩衝液。
（3）將醋酸纖維素薄膜毛面向上貼於電泳槽支架上拉直。用微量吸管吸取無溶血血清3～5μl於橫線處沿橫線加樣，樣品應與薄膜的邊緣保持一定的距離，以免電泳圖譜中的蛋白區帶變形，待血清滲入薄膜後，反轉薄膜，使光面朝上，平直地貼於電泳槽支架上，用雙層濾紙或四層紗布將薄膜的兩端與緩衝液連通，稍待片刻。
（4）接通電源，注意醋酸纖維素薄膜上的正、負極，切勿接錯。電壓90～150v，電流0.4～0.6mA/cm（不同的電泳儀所需電壓，電流可能不同，應靈活掌握），夏季通電45min，冬季通電時間稍長，約爲60min，電泳區帶展開約25～35mm即可。
（5）染色：通電完畢，取下薄膜直接浸於麗春紅S染液或氨基黑10B染色液中，染色5～10min（以白蛋白區帶染透爲止），然後在漂洗液中漂去剩餘染料，直至背景無色爲止。
（6）定量：
①比色法：將漂洗的薄膜吸乾，剪下各染色的蛋白區帶入相應的試管中，在白蛋白管中加0.4mol/L氫氧化鈉6ml（計算時吸光度乘以2），其餘各管加3ml，振搖數次，置37℃水箱20min使其色澤浸出。氨基黑10B染色用分光光度計在620nm處讀取各管吸光度，然後計算出各管的含量（同時做空白管對照）。
麗春紅S染色時浸出液用0.1mol/L氫氧化鈉，加入量同上法。10min後，白蛋白管內加400ml/L醋酸0.6ml（計算吸光度時乘以2），其餘各管加0.3ml，以中和部分氫氧化鈉，使色澤加深，必要時離心，取上清液用分光光度計在520nm處讀取各管的吸光度（同時作空白對照），然後計算各自的含量。
②光密度計掃描法：A.透明：吸去薄膜上的漂洗液（爲防止透明液被稀釋影響透明結果），將薄膜浸入透明液中2～3min，然後取出，以滾動的方式平貼於潔淨無劃痕的載物玻璃片上（切勿產生氣泡），將此玻片豎立片刻，除去多餘透明液後，置於恆溫90℃至100℃的烘箱內，烘烤10～15min，取出冷卻至室溫，用此法透明的各蛋白區帶鮮明，薄膜平整，可供直接掃描和永久保存（用氫萘或液體石蠟透明，應將漂洗過的薄膜烘乾後進行透明，此法透明的薄膜不能存久，且易發生皺摺）。B.掃描定量：將已透明的薄膜放入全自動光密度計或其他光密度計暗箱內，進行掃描分析。
5.7 正常值
醋酸纖維素膜電泳法：白蛋白0.61～0.71（61%～71%）、α1球蛋白0.03～0.04（3%～4%），α2球蛋白0.06～0.10（6%～10%），β球蛋白0.07～0.11（7%～11%），γ球蛋白0.09～0.18（9%～18%）。
5.8 化驗結果臨牀意義
（2）α1球蛋白（糖蛋白）增高：見於原發性肝癌。在重型肝炎、肝硬化、肝昏迷時則減少，與白蛋白呈正相關。肝病時測定α1球蛋白對判斷肝炎的嚴重程度和預後有參考價值。一般情況下，α1球蛋白增加示病情較輕，α1球蛋白減少則提示病情較重，在嚴重肝功能衰竭時，其血清含量可顯著降低。
（3）α2球蛋白：病毒性肝炎初期無明顯變化，一週後逐漸增加，亞急性肝炎和急性肝壞死、失代償期肝硬化則減少。
（4）β球蛋白增高：見於脂肪肝、高脂血症、腎病綜合徵、糖尿病合併高膽固醇血癥、梗阻性黃疸、惡性腫瘤。在膽汁淤積性肝病時其含量升高，與α2球蛋白升高相平行。降低於見於急、慢性肝炎，肝硬化，尤以失代償期肝硬化和壞死肝硬化下降最爲顯著。
（5）γ球蛋白增高：見於慢性肝炎、肝硬化、肝膽疾患。典型肝硬化尚可見β和γ帶相融合，形成β-γ橋。肝病患者γ球蛋白的變化可反映病情的嚴重程度。隨病情好轉，其含量可逐漸降至正常，如一直在高水平持續不降，提示病情嚴重，預後不良，並有向慢性肝炎及肝硬化發展的趨勢。此外，感染、血吸蟲病、多發性骨髓瘤、結締組織病等也可升高。降低見於丙種球蛋白缺乏症、部分化療患者等。
另外，多發性骨髓瘤在β球蛋白區帶與γ球蛋白區帶之間常出現M球蛋白帶；雙白蛋白血癥可見雙條白蛋白區帶。
5.9 附註
（1）每次電泳時應交換電極，可使兩側電泳槽內緩衝液的正、負離子相互交換，從而使緩衝液保持在一定的pH水平，然而，每次電泳時薄膜數量不同，故緩衝液在使用10次後，最好棄去，重新配製，否則影響電泳效果。
（2）電泳槽內緩衝液高度保持一定，過低會出γ球蛋白的電滲現象（向陰極移動）。同時，電泳槽兩側液麪應保持水平一致，否則通過薄膜時有虹吸現象，將會影響蛋白質分子的泳動速度。
（3）電泳失敗的原因：
①電泳圖譜不整齊：常見於點樣不均勻，位置不佳，薄膜尚未乾燥或水分蒸發，緩衝液變質，電泳時薄膜位置放置不正確，使電流方向不平行等。
②蛋白組分分離不佳：如點樣過多，電流過低，薄膜結構過分細緻，透水性差，導電差等。
③白蛋白結果偏低：見於染色時間不足，染色液陳舊，不透明直接掃描等。
④薄膜透明不完全：見於溫度未達到90℃以上將標本放入烘箱，透明液時間過長或薄膜的浸泡時間不足等。
⑤透明膜上有氣泡：見於玻璃片不乾淨（油脂、污垢等）使薄膜部分與其脫開，貼膜時操作不慎將氣泡裹入等。
（4）點加樣本時，一定要注意薄膜的毛面和光面，將樣本點在毛面上。
（5）放置薄膜時，要注意其正、負極，切勿接錯。