3 概述
各種血紅蛋白具有不同的等電點，在一定pH值的緩衝液中可帶不同電荷。在鹼性緩衝液中帶負電荷，反之帶正電。在一定的電場中帶有不同電荷的Hb分子可分別向正極或負極移動，其移動速度隨Hb分子所帶電荷的強弱而不同，結果形成各種區帶——電泳圖譜。從電泳圖譜中可初步鑑別出各種異常血紅蛋白，經光電比色或掃描的方法求其含量。
4 血紅蛋白電泳的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 取材
4.4 血紅蛋白電泳的測定原理
（1）微量血紅蛋白電電泳：血紅蛋白中的各組分由於其分子表面所帶電荷性質與數量不同而等電點各異。在不同pH的電場中，因其所帶電荷差異而泳動速度不同。由此可將血紅蛋白的各組份分開。異常血紅蛋白分子如果有電荷的改變，則會在正常電泳圖形的其他部位出現異常區帶，以達到分離鑑定的目的。
在電泳法中，因所用支持物不同，有紙上電泳、瓊脂電泳、澱粉膠電泳、澱粉板電泳、醋酸纖維素膜電泳等。所用的電泳緩衝液有pH8.6或8.9的巴比妥緩衝液，pH9.1、9.0、8.9及8.5的TEB緩衝液。pH16.8和7.0的磷酸緩衝液等。
目前臨牀實驗室首選的是醋酸纖維素膜鹼性電泳。該方法操作簡易、電泳時間短，分辨率高，常用於異常血紅蛋白的篩選。必要時再用pH6.5或pH6～6.2緩衝液的酸性電泳進一步進行異常血紅蛋白的鑑別。
（2）異常肽鏈鑑定（尿素解離法）：將巰基乙醇與尿素加入血紅蛋白溶液後，可使血紅蛋白分子中二硫鍵還原，空間結構被破壞，珠蛋白被裂解爲肽鏈亞單位。不同肽鏈的等電點不同，遷移率各異，可用電泳將肽鏈分開。異常血紅蛋白的異常肽鏈也可用此法分開，並根據其位置判斷屬何種異常。
4.5 試劑
4.5.1 （1）微量血紅蛋白電電泳：
①TEB緩衝液（pH8.5，浸膜用）：
三羥甲基氨基甲烷 （Tris） 10.2g EDTA 0.6g
硼酸（boric acid） 3.2g 蒸餾水 加至1000ml
②BB緩衝液（電泳槽用）：
蒸餾水 加至1000ml
③血紅蛋白溶液：按前法制備的血紅蛋白溶液稀釋成30～50g/L。
④麗春紅染液：
此爲貯存液。最好用安瓿分裝，每支2ml。用前按每毫升貯存液加蒸餾水19ml稀釋。
⑥透明液：
4.5.2 （2）醋酸纖維膜電泳染色比色法：
②染色液：
溶解後貯存於棕色瓶內。
③漂洗液：
蒸餾水 50ml
④浸出液 NaOH 0.4mol/L。
①解離液：
置於冰箱備用。
②浸膜液：
尿素 48g Tris 1.14g
蒸餾水 加至100ml
4.6 操作方法
4.6.1 （1）微量血紅蛋白電電泳：
①浸膜：將醋酸纖維素膜漂浮於TEB緩衝液表面，待其均勻浸透沉下後，至少20min纔可使用。這樣可防止產生氣泡。
②點樣：取出醋酸纖維薄膜用濾紙吸去多餘的水份。用微量吸管吸取血紅蛋白溶液置於多標本加樣器的凹型槽內,以多標本加樣器蘸取血紅蛋白液，點樣於醋酸纖維素膜無光澤面。距陰極端1.5～2cm處，點樣量約3～5μl同時平行地點上正常血紅蛋白溶液作對照。
③電泳：在微型電泳槽兩側緩衝液槽內分別加入等量的BB緩衝液，以二層濾紙做鹽橋搭在醋酸纖維薄膜支架上。將膜無光澤面向下，點樣端接負極，平衡5min。接通電源。電壓180V，電流量約爲0.2mA/cm膜寬，電泳時間20～30min。槽中緩衝液可在倒換電極後再用1次。
④染色：電泳後的薄膜放在麗春紅染色液中染色10min左右取出，用3%醋酸漂洗數次，至背景呈白色，陰乾。
⑤透明：將醋酸纖維素膜置透明液中浸溼，貼於潔淨玻璃板上，用玻棒趕去二者之間的氣泡。於一層析缸內倒少量冰醋酸，將玻璃板反蓋在層析缸上（有薄膜面向內）。以揮發的冰醋酸燻10～20min，待膜透明即可取下。
4.6.2 （2）醋酸纖維素膜電泳染色比色法：
①將TEB緩衝液浸泡過的4cm×6cm的醋酸纖維素膜取出，用濾紙吸乾多餘水分。於無光澤面距陰極端1.5cm處，用血紅蛋白吸管直線狀均勻整齊地滴加50g/L Hb溶液約5μl，待血紅蛋白液滲入膜內後，將膜翻轉置電泳槽支持板的濾紙橋上。
②電泳：電壓180V,時間30～40min，以Hb各區帶完全分離爲準。電泳後交換電極，電泳緩衝液可多次使用。
③染色：將膜浸入染色液中，冬天需染2h,夏天或將染缸置25～30℃．可只染30min左右。注意如染色不透（如時間太短或血紅蛋白溶液過濃），或電壓過高使HbA帶過於集中，易致色帶剝脫，均影響定量的準確性。染畢用漂洗液洗數次，至背景漂淨爲止。
④定量：將漂淨的膜取出，分別剪下各區帶，及相當於HbA2大小的對照區帶，各自放在相應的試管中。於HbA管中加浸出液10ml，其餘各管加浸出液2ml，浸泡20min，時時振搖。使色帶完全洗脫（注意在氣溫較高時，洗脫時間不可過長，否則洗脫液藍色減退，並逐步變爲紫紅色）。將洗脫液混勻，用721分光光度計，波長620nm，以空白調零，測各管吸光度。
⑤計算：同直接比色法。
4.6.3 蠟酸纖維薄膜電泳直接比色法
操作：
（1）將醋酸纖維素膜作1/3切開（4cm×8cm）漫於TEB緩衝液中，10min以上。
（2）取出醋酸纖維素膜用濾紙吸去多餘的水份。以Hb吸管吸取100g/L溶血液10μl均勻塗於玻璃推片下緣，在距薄膜陰極端1.5～2.0cm處於無光澤麪點樣。每個標本同時做兩份。
（3）電泳：緩衝液同微量血紅蛋白電電泳。電壓180V，時間40min～1h。（以各區帶明顯分開爲宣）電泳後交換電極，緩衝液可反覆使用。
（4）洗脫與定量 分別剪下HbA,HbA2和相當於HbA2大小的對照區帶。如有異常Hb區帶（HbX）也同時剪下，各自放在相應的試管中。於HbA管中加TEB緩衝液10ml，其餘各管加TEB緩衝液2ml，浸泡30min，時時振搖。待完全洗脫後。將
洗脫液混勻，用721分光光度計，波長413nm。以空白調零，測各管吸光度。
（5）計算：
如有異常HbX，則計算HbA2%時，分母中還要加：HbX吸光度。
HbX%＝
4.7 正常值
電泳法：
HbA 95%
HbA2 1.1%～3.2%
HbA3 2%～3%
Singer法：HbF＜4%
4.8 化驗結果臨牀意義
（1）增高：重型地中海貧血（HbA2、HbF增高）、輕型β-地中海貧血（HbA24%～10%）