1 檢查名稱
4 概述
組織纖溶酶原激活物是一種單鏈糖蛋白，主要由血管內皮細胞合成、分泌，不斷釋放入血液，廣泛存在於機體的各種組織內，肝臟是組織纖溶酶原激活物滅活的主要場所。它對纖維蛋白有高度親和力，然後將酪氨酸纖溶酶原形成纖溶酶。降解纖維蛋白（原）和部分凝血因子。是纖溶系統的關鍵物質。
5 原理
（1）活性測定（t-PA∶A，髮色底物法之一）：血漿優球蛋白部分含有包括t-PA以及全部凝血因子，但不含PA抑制物。加入過量的纖溶酶原與纖維蛋白的共價物，樣品中之t-PA易吸附於纖維蛋白，並將血纖溶酶原轉變成纖溶酶，後者使髮色底物顯色。血漿t-Pt-PA與顯色的深淺呈正相關。
（2）活性測定（t-PA∶A髮色底物法之二）：在t-PA和加速劑作用下，纖溶酶原轉變爲纖溶酶，後者使髮色底物S-2390釋放出髮色基團PNA。PNA顯色的深淺與纖溶酶和t-PA呈正比關係。
（3）抗原測定（t-PA∶Ag）ELISA法：本試驗根據雙抗體夾心法原理，即將純化的t-PA單克隆抗體包被在固相載體上溫育，然後加含有抗原的待測標本。標本中的t-PA抗原與固相載體上的抗體形成複合物。此複合物與過氧化物酶標記的t-PA單克隆抗體起抗原抗體結合反應，形成t-PA-POD複合物。後者可使鄰苯二胺基質液呈棕色反應，其反應顏色深淺與標本中t-PA含量呈正比關係。
6 試劑
6.1 （1）活性測定（t-PA∶A，髮色底物法之一）：
②纖維蛋白-纖溶酶原共價物：375mg/L的纖維蛋白，250μ/L的纖溶酶原。
③髮色底物：3mol/L S-2251（H-D-Val-Leu-Lys-PNA）。
⑤0.25%醋酸。
⑥t-PA標準1和2（S15.6IU/ml，S22.8IU/ml）。
6.2 （2）活性測定（t-PA∶A髮色底物法之二）：
上海醫科大學試劑盒。
③人纖溶酶原。
④髮色底物S-2390。
⑤濃緩衝液TB。
⑥加速劑。
⑦濃抗凝液。
⑧濃酸化液。
6.3 （3）抗原測定（t-PA∶Ag）ELISA法：
③基質：鄰苯二胺。
④基質緩衝液：0.2mol/L檸檬酸，0.2mol/L檸檬酸鈉緩衝液。
⑥洗滌液：0.025mol/L氯化鈣-Tween-20-PBS緩衝液。
⑨30% H2O2。
7 操作方法
（1）活性測定（t-PA∶A，髮色底物法之一）：
①血漿處理：按表1進行操作。
②操作方法：按表2進行。
（2）活性測定（t-PA∶A髮色底物法之二）：
①血漿製備：靜脈採血，置於含1/10體積抗凝液的硅化試管中，儘快低溫分離血漿。取血漿200μl，加酸化液200μl，混勻，置－30℃保存。測定時酸化血漿作1∶60稀釋。
②取去t-PA血血漿和t-PA標準品配製標準t-PA系列（表3）。
③加樣：取潔淨96孔平底酶標板一塊，將上述準備好的待測血漿樣品和t-PA標準品加到各孔中，100μl/孔。
④髮色底物混合液：將纖溶酶原、髮色底物和加速劑混合，立即100μl/孔加至酶標板各孔中。
⑤反應：置溼盒中，37℃溫育5h，加50%冰醋酸20μl終止反應。
⑥測定：測定各孔A405。以標準系列中不含t-PA孔調零點，然後讀數。
③用基質緩衝液溶解鄰苯二胺（8mg/ml），並加入10μl 30% H2O2。
④將t-PA標準倍比稀釋成10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125IU/ml。
⑤標本稀釋：1份檸檬酸鈉抗凝血漿加5份稀釋液。如果估計t-PA值增高，血漿作1∶10稀釋。
⑥用稀釋之t-PA抗體包被ELISA反應板，每孔200μl，溫育過夜，然後用洗滌液洗3次。
⑧加過氧化物酶抗體複合物200μl，溫育1h後，同上洗滌3次，洗後立即加基質。
⑨每孔加基質200μl，顯色10～15min。
⑩加硫酸（3mol/L）50μl或鹽酸（1mol/L）100μl，10min中止反應，於492nm，2h內比色，以稀釋緩衝液爲本底。
⑪據吸光度讀數由標準曲線查得t-PA含量。
9 臨牀意義
（1）活性測定（t-PA∶A，髮色底物法之一）：
①肝壞死常伴有纖溶活性的異常，由於消除功能障礙，故t-PA∶A往往增高。但同時由於PAI的活性增強故t-PA的活性實際上是降低的。在DIC和伴有血栓形成傾向的疾病往往有t-PA活性減低。冠心病心肌梗死患者PA活性減低。
②先天性t-PA活性增強已有報道。急性早幼粒細胞白血病患者t-PA往往增高。
③遺傳性PA活性缺乏爲常染色體顯性遺傳。患者表現爲多發性靜脈血栓形形形成。
（2）活性測定（t-PA∶A髮色底物法之二）：
①t-PA∶A增高：表明纖溶活性亢進，見於原發性及繼發性纖溶症，如DIC等。
②t-PA∶A減低：表明纖溶活性減弱，見於高凝狀態和血栓性疾病。