以Bacmid-桿狀病毒-昆蟲細胞系統表達人FGF-9①
...腦膠質瘤組織獲取人FGF-9全編碼區cDNA,將其克隆入pCRTMⅡ質粒及pYEX4T-1真核表達質粒,經DNA自動測序儀進行DNA序列測定。將人FGF-9cDNA定向克隆入pFastBac質粒,進一步將其轉座入Bacmid中,在昆蟲細胞Sf9中進行表達,採用SDS-PAGE對錶達產...
合作平臺;醫學論文;臨牀醫學與專科論文;檢驗醫學丙型肝炎病毒Core基因重組表達載體Pet32a-Core的構建
...似丙型肝炎患者的血清標本採自深圳某傳染病醫院;Pet32a質粒及BL21大腸桿菌購自Promega公司;抗HCV-IgGELISA試劑盒購自上海科華生物技術有限公司,RNA提取試劑盒用RocheHighPureviralRNAkit,RNA擴增用TaKaRaOneStepRNAPCRKit,AMV逆轉錄酶、Taq酶...
醫源資料庫;在線期刊;中國熱帶醫學雜誌;2008年第8卷第4期大鼠MHC-Ⅰ類基因cDNA的克隆
...獲得了MHC-ⅠcDNA。 1材料與方法 1.1材料E.coliDH5a和質粒pBV220爲華西醫科大學鉤體研究室伍衛華教授惠贈。總RNA提取試劑盒(QIAGen公司),RT-PCR及PCR試劑盒(GibcoBRL),EcoRI,BamHI,PruI,SspI,PstI內切酶及DNAMarker(華美公司)...
合作平臺;醫學論文;臨牀醫學與專科論文;檢驗醫學HCV核心區基因的截短及其表達
...核心抗原。方法設計一對特異性引物,以含HCV全長基因的質粒pBRTM/HCV1-3011爲模板,擴增出HCV截短的核心抗原(1-120aa)的基因,克隆於表達載體pGEX-4T3,並轉化於大腸桿菌BL21,IPTG誘導HCV截短的核心抗原的表達,表達產物經過SDS-PAGE,...
醫源資料庫;在線期刊;中華醫藥雜誌;2006年第6卷第11期AmpCβ內酰胺酶的檢測
...菌液,再用凍融法(-70℃快速冷凍、室溫或37℃水浴快速解決,反覆5次)或超聲粉碎法(4℃,超聲粉碎)破碎菌細胞,使其菌體內的酶釋放出來,再離心(12,000r/min,1h)去除細菌碎片,收集上清液即爲β內酰胺酶的粗提物。取...
合作平臺;在線期刊;中華醫學研究雜誌;2005年第5卷第4期;綜述登革病毒E蛋白區段基因克隆及高效表達
...表位及免疫功能的研究奠定基礎。方法 以含有D2VE區的質粒p30.VD2爲模板,PCR擴增了編碼D2VE蛋白308~468aa區段的基因片段,以pMY爲表達載體,構建了表達質粒pDE1,並用酶切法使之缺失跨膜區疏水aa較多的編碼序列,又構建了表達質...
合作平臺;醫學論文;臨牀醫學與專科論文;檢驗醫學內切酶的特性、酶解和瓊脂糖凝膠電泳
...帶呈現出紅色熒光,易於檢測。可以檢測10ng的DNA。 質粒pCMV-Myc-T10NEB標準分子量片段(1kbDNALadder)EcoR1和Xho1核酸內切酶(Takara)EcoR1和Xho1酶解緩衝液(10×Hbuffer)瓊脂糖TBE或TAE緩衝液(10×)溴化乙啶染色液(10mg/ml)上樣液(6×):0.25%溴酚...
醫藥經濟;生物技術;實驗技術;生化與分子技術簡化的兩步法細菌內同源重組高效製備p53基因重組腺病毒表達載體
...位點,將p53基因亞克隆連接到經相同酶切的pshuttle-cmv轉移質粒上,轉化DH5α篩選卡那黴素抗性菌落構建重組腺病毒轉移質粒pshuttle-cmv-p53用Pmel酶切線性化採用兩步法進行同源重組:先將腺病毒骨架質料pAdEasy-1轉化氯化鈣法制備的BJ...
醫源資料庫;在線期刊;中華醫藥雜誌;2006年第6卷第2期結核桿菌HSP65與漢坦病毒H8205株G2基因的構建
...核桿菌H37Rv株基因中,擴增出HSP65的編碼基因,從T-H8205G2質粒擴增出G2蛋白的編碼基因,經相應限制性核酸內切酶消化後,插入真核表達載體pcDNA3.1/His,並將此重組質粒通過酶切、SDS-PAGE分別測定表達產物的相對分子量。結果獲得...
醫源資料庫;在線期刊;中國熱帶醫學雜誌;2006年第6卷第9期中國人IL-18結合蛋白Cdna的克隆和序列分析
...院附屬醫院婦產科提供;總RNA提取試劑盒、RT-PCR試劑盒、質粒提取試劑盒均爲Promega公司產品;E.coli 菌株DH5α和質粒pcDNA3爲本室保存;核酸限制性內切酶EcoR Ⅰ、HindⅢ以及T4DNA連接酶均購自Promega公司。 1.2 總RNA提取 取...
合作平臺;醫學論文;臨牀醫學與專科論文;檢驗醫學