3 概述
梅毒螺旋體(treponema pallidum,TP)屬密螺旋體屬,是人類梅毒的病原體,梅毒是人類的主要性病之一。梅毒患者血清中有兩類抗體;一類是反應素,是IgA與IgM型混合抗體,能與哺乳動物心肌提取的心類脂抗原發生非特異反應,對機體無保護作用,但可供血清學診斷篩選試驗用。另一類是梅毒螺旋體特異性抗體,在厭氧條件下和有補體存在時,能抑制活的梅毒螺旋體運動,並能將其殺死或溶解,可以用來對梅毒進行確證實驗。梅毒螺旋體培養非常困難,故主要用血清學診斷方法進行診斷。
8 梅毒螺旋體制動試驗的原理
用活的梅毒螺旋體Nichols株與患者滅活血清及新鮮補體混合,在厭氧條件下孵育16h,然後在暗視野顯微鏡下觀察有活動力的螺旋體的百分數,並與正常人血清對比。若血清內有梅毒螺旋體抗體,則可抑制梅毒螺旋體,使其失去活動力。若有活動力的螺旋體數爲對照組的40%或40%以下,則爲陽性。
9 試劑
本試驗有商品試劑盒。2~10℃避光可保存1年。但試劑瓶開啓後應及時使用。
10 操作方法
(1)用吸收劑對業經56℃水浴30min滅活的被檢血清作1∶5稀釋,充分混勻。
(2)加0.03ml分別用PBS和吸收劑作1∶5稀釋過的非特異性控制血清於固着抗原螺旋體的玻片反應圈內。此爲陰性對照。
(3)加0.03ml經吸收劑作1∶5稀釋過的最小反應性(+)控制血清於玻片反應圈內。此爲陽性對照。
(4)加0.03ml經吸收劑作1∶5稀釋過的被檢血清於玻片反應圈內。
(5)將此玻片置於溼盒內,36℃±1℃,保溫30min。
(6)將玻片置於玻片架上,用PBS(pH值7.2±0.1)衝淋玻片5s,然後浸入此PBS中5min。再拎出、浸沒玻片,濯洗30次。
(7)用業經120℃ 15min消毒的蒸餾水衝淋5min。用吸水紙輕輕將玻片吸乾。
(8)加0.03ml異硫氰酸熒光素標記的抗人IgG(FITC-標記抗人IgG)於每個反應圈內。重複5~7步驟。
(9)加固定液1小滴於玻片上,再覆上蓋玻片,切勿形成氣泡。
(10)將玻片置熒光顯微鏡下,先用鎢燈爲光源,在暗視野下尋找Nichols螺旋體。然後改用高壓汞燈,經濾光片選取紫外光段即可觀看熒光結果。讀片應在4h內完成。
11 正常值
陰性。