基因轉染

遺傳學 生物學

心氣虛,則脈細;肺氣虛,則皮寒;肝氣虛,則氣少;腎氣虛,則泄利前後;脾氣虛,則飲食不入。
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1 拼音

jī yīn zhuǎn rǎn

2 英文參考

gene transfection

3 註解

4 轉染的概念

轉染(transfection)指真核細胞由於外源DNA摻入而獲得新的遺傳標誌的過程。

5 轉染方法分類

對外源基因轉染方法的要求包括:

轉移效率高,不影響細胞正常生理活動,低毒性,容易使用,重複性好,易獲得穩定轉化子.

根據轉染的機制不同可劃分爲化學轉染法和物理轉染法兩大類.

5.1 化學轉染

1.DEAE-葡聚糖

DEAE葡聚是最早應用哺乳動物細胞轉染試劑之一,DEAE-葡聚糖是陽離子多聚物,它與帶負電的核酸結合後接近細胞膜而被攝取,用DEAE-葡聚糖轉染成功地用用於瞬時表達的研究,但用於穩定轉染卻不是十分可靠。

2.磷酸鈣法

磷酸鈣法是磷酸鈣共沉澱轉染法,因爲試劑易取得,價格便宜而被廣泛用於瞬時轉染穩定轉染的研究,先將DNA和氯化鈣混合,然後加入到PBS中慢慢形成DNA磷酸鈣沉澱,最後把含有沉澱的混懸液加到培養的細胞上,通過細胞胞膜的內吞作用攝入DNA。磷酸鈣似乎還通過抑制血清中和細胞內的核酸酶活性而保護外源DNA 免受降解.

3.人工脂質體

人工脂質體法採用陽離子脂質體,具有較高的轉染效率,不但可以轉染其他化學方法不易轉染細胞系,而且還能轉染從寡核苷酸到人工酵母染色體不同長度的DNA,以及RNA,和蛋白質.此外,脂質體體外轉染同時適用於瞬時表達和穩定表達,與以往不同的是脂質體還可以介導DNA和RNA 轉入動物和人的體內用於基因治療.人工合成的陽離子脂質體和帶負電荷的核酸結合後形成複合物,當複合物接近細胞膜時被內吞成爲內體進入細胞質,隨後DNA 複合物被釋放進入細胞核內,至於DNA 是如何穿過核膜的,其機理目前還不十分清楚.。

5.2 物理方法

1.顯微注射顯微注射雖然費力,但是非常有效的將核酸導入細胞細胞核方法

2.電穿孔

這種方法常用來製備轉基因動物,但卻不適用於需要大量轉染細胞的研究。電穿孔法常用來轉染如植物園生智體這樣的常規方法不容轉染細胞。電穿孔脈衝電流在細胞膜上打孔而將核酸導入細胞內。導入的效率與脈衝的強度和持續時間有關係。

3.基因槍法

基因槍依靠攜帶了核酸的高速粒子而將核酸導入細胞內,這種方法適用於培養的細胞核在體內的細胞

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