5 轉染方法的分類
轉移效率高,不影響細胞正常生理活動,低毒性,容易使用,重複性好,易獲得穩定轉化子.
5.1 化學轉染法
1.DEAE-葡聚糖法
DEAE葡聚是最早應用哺乳動物細胞轉染試劑之一,DEAE-葡聚糖是陽離子多聚物,它與帶負電的核酸結合後接近細胞膜而被攝取,用DEAE-葡聚糖轉染成功地用用於瞬時表達的研究,但用於穩定轉染卻不是十分可靠。
2.磷酸鈣法
磷酸鈣法是磷酸鈣共沉澱轉染法,因爲試劑易取得,價格便宜而被廣泛用於瞬時轉染和穩定轉染的研究,先將DNA和氯化鈣混合,然後加入到PBS中慢慢形成DNA磷酸鈣沉澱,最後把含有沉澱的混懸液加到培養的細胞上,通過細胞胞膜的內吞作用攝入DNA。磷酸鈣似乎還通過抑制血清中和細胞內的核酸酶活性而保護外源DNA 免受降解.
3.人工脂質體法
人工脂質體法採用陽離子脂質體,具有較高的轉染效率,不但可以轉染其他化學方法不易轉染的細胞系,而且還能轉染從寡核苷酸到人工酵母染色體不同長度的DNA,以及RNA,和蛋白質.此外,脂質體體外轉染同時適用於瞬時表達和穩定表達,與以往不同的是脂質體還可以介導DNA和RNA 轉入動物和人的體內用於基因治療.人工合成的陽離子脂質體和帶負電荷的核酸結合後形成複合物,當複合物接近細胞膜時被內吞成爲內體進入細胞質,隨後DNA 複合物被釋放進入細胞核內,至於DNA 是如何穿過核膜的,其機理目前還不十分清楚.。
5.2 物理方法
1.顯微注射顯微注射雖然費力,但是非常有效的將核酸導入細胞或細胞核的方法。
2.電穿孔
這種方法常用來製備轉基因動物,但卻不適用於需要大量轉染細胞的研究。電穿孔法常用來轉染如植物園生智體這樣的常規方法不容易轉染的細胞。電穿孔靠脈衝電流在細胞膜上打孔而將核酸導入細胞內。導入的效率與脈衝的強度和持續時間有關係。
3.基因槍法