3 概述
LDH-X是精子細胞的一種特異酶,存在睾丸初級精母細胞、精子細胞、精子以及精漿中,以精子含量最高,它是精子糖代謝所必需的酶,爲精子在生殖道運動提供充足能源。顯然,LDH-X與精子的生成、代謝、獲能以至受精有密切關係。
5 精液乳酸脫氫酶-X的醫學檢查
5.1 檢查名稱
5.2 分類
5.3 精液乳酸脫氫酶-X的測定原理
正常精液內含有6種乳酸脫氫酶同工酶,其中LDH-X爲精子特異性酶。利用LDH-X的特異底物2-酮基己酸,可測定出LDH-X活性,再用丙酮酸作爲總LDH的底物,測定出總的LDH活性,即可求出LDH-X的相對比值和絕對比值。
5.4 試劑
(1)pH8.6巴比妥緩衝液(離子強度0.06):稱取巴比妥鈉6.38g,巴比妥0.83g,混合加蒸餾水500ml。
(2)pH7.5磷酸緩衝液(0.1mol/L):稱取磷酸二氫鉀2.16g,磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)30.13g,溶於蒸餾水中,並稀釋至1L。
(3)0.5mol/L的乳酸鈉溶液,吸取70%~80%DL-乳酸鈉溶液7.42ml,加蒸餾水至100ml。
(4)顯色試劑(臨用前配製)
①1mg/ml PMS水溶液(避光)
③NBT 12mg放乳鉢中研磨後,溶於pH7.5磷酸鹽緩衝液中3ml。
(5)顯色合劑
(7)洗脫液,正丙醇9份,二甲亞礬1份混合即可。
5.5 操作方法
(1)點樣:將醋酸纖維素薄膜切成2.0cm×8.0cm大小,每份標本取兩條,標明“甲”,“乙”,將乙條浸入在pH7.5的磷酸鹽緩衝液中。將甲條浸在巴比妥緩衝液中,完全浸透後取出(大約2h),用濾紙吸乾、於粗糙面距一端1.5cm處垂直點樣(點樣端靠陽極)。
(2)通電:電流0.6~1.2mV/cm寬,電壓120~140V,電泳時間60min。
(3)顯色:電泳結束前15min配製染色液,於中號平皿內。將浸透的乙條取出用濾紙吸乾,放入染色液內。電泳畢後;先取出乙條,其光面向下放在乾淨的載玻片上,再取出甲條,迅速吸乾兩端緩衝液,將粗麪向下,蓋在乙條上。將此載玻片移入有蓋瓷盤內,盤內放置用pH7.5的磷酸緩衝液泡過的紗布一塊,以保持溼度,於37℃溫箱中保溫40min。可顯出3~5條紫紅色區帶,從陽極開始,依次爲LDH1,LDH2,LDH3,LDH4,LDH5。保溫結束後將薄膜在2%醋酸溶液中漂洗3次,每次約1min,最後用濾紙吸乾。
(4)定量:將已顯色的“甲”、“乙”二條薄膜之各區帶分別剪成小片置於試管中,每一試管中加洗脫液2.0ml,充分振搖,靜止20min後再振搖1次,即可進行比色(用分光光度計波長490nm,以洗脫液校正吸光度到0點)。
5.6 正常值
LDH-X/LD>40%
5.7 化驗結果臨牀意義
LDH-X活性和相對活性(LDH X/LDH)與精子濃度特別是活精子濃度呈良好的正相關,活性減低可致生育力下降。
睾丸萎縮、精子生成缺陷及少精或無精症患者,LDH-X活性相對降低或消失。這說明LDH-X活性與睾丸生精功能有關,是評價睾丸生精功能的良好指標。
5.8 附註
(2)草酸鹽能抑制乳酸脫氫酶的活力,故不能用草酸鉀作爲抗凝劑的抗凝血來測定。
(3)如長期食用粗製株籽油可致精子生成障礙,甚至無精子生成。