2 概述
混合淋巴細胞培養(mixed lymphocyte culture,MLC)是指將受者和供者的淋巴細胞混合培養數天後,以反應細胞的增殖程度判斷兩者淋巴細胞相容性的試驗[1]。淋巴細胞相容性是組織相容性的指標之一[1]。
6 用品及準備
基本同淋巴細胞毒試驗。
7 方法及內容
(1) 刺激細胞的處理:有兩種方法,一種是將受試細胞懸液用60Co或X射線40Gy照射後的細胞直接接種。另一種是使用絲裂黴素處理。向細胞懸液內加入絲裂黴素(終濃度 40mg/ml),置37℃水浴30min,然後用RPM1640培養液洗滌3次。最後將細胞懸浮於1640培養液中計數,調整細胞數至1×106/ml。
(2) 準備微量加樣器,用75%酒精、無菌雙蒸水、無菌生理鹽水依次各洗3遍。
(4) 按照雙向和單向混合培養的實驗設計接種細胞。①雙向微量混合淋巴細胞培養 (MLC-D)對照組,AA、BB每孔加A細胞 100μl或B細胞100μl,實驗組:AB每孔加A細胞50μl,B細胞50μl。②單向微量混合淋巴細胞培養(MLC-S)。對照組:AAm、BBm每孔加反應細胞50μl,自身刺激細胞50μl;實驗組:ABm、BAm每孔加反應細胞50μl,刺激細胞50μl,每孔總液量爲100μl,每種組合 3~4個復管。
(5) 培養板置於37℃、含5%CO2溼潤空氣環境中培養5d。
(6) 5d後每孔加入2μl(36kBq)3H-TdR,繼續37℃培養。
(7) 18h後,用細胞收集器將放射性樣品收集於玻璃纖維濾紙上,水洗20s,空吸10s。
15 參考資料
- ^ [1] 中華人民共和國衛生部.WS/T 203—2001 輸血醫學常用術語[Z].2001-7-20.