3 概述
鈣調素(calmodulin,CaM)是一種重要的鈣調節蛋白,幾乎存在於一切真核細胞中,作爲鈣離子的受體與細胞多種功能有關。多種疾病血液中CaM含量發生變化。採用放射免疫方法測定血漿caM濃度,對臨牀某些疾病的研究是一項有意義的指標。
4 鈣調素的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 鈣調素的測定原理
RIA法:125I標記的CaM抗原與非標記的CaM抗原和限量的抗CaM特異性抗體競爭性結合,當125I標記CaM與抗CaM的量保持一定時,形成的放射性抗原抗體沉澱物的量反映待測樣品中CaM含量。
4.4 試劑
(1)CaM純品:自制同競爭ELISA法。
(3)Bolton-Hunter試劑(BH):Sigma公司產品。
(4)免抗CaM抗體制備:同ELISA法。
(5)125I-CaM的製備。先製備125I-BH試劑,再將該試劑通過酰胺鍵與CaM的末端氨基相聯製得125I-CaM。將1μg重蒸苯溶解的BH試劑以氯胺T法加以碘化,經測試計算碘化率(Y)爲53%。於125I-BH試劑中加入5μg的CaM(溶於0.125mol/L pH8.4的硼酸緩衝液中)於冰浴中充分攪拌30min,再加入100μl 0.2mol/L甘氨酸緩衝液終止反應,最後以Sephadex G-25柱(0.8cm×25cm)分離125I-CaM,經測算比放射性強度爲1.56MBq/μg。
4.5 操作方法
(1)各管加入0.125mol/L pH 8.4硼酸鹽緩衝液(含10g/L BSA)100μl。
(2)待測血清或系列標準液100μl。
(3)適量稀釋抗體100μl。
(4)125I-CaM 100μl(約4×104cpm/min)。
混勻後於4℃反應24h,次日取出,以PEG法分離後吸棄上清。將上述分離後的沉澱物,於γ計數器上測定各管放射性強度並於半對數紙上繪製標準曲線,即可從標準曲線中算出樣品CaM濃度。
4.6 正常值
血漿:(623±78.7)μg/L。