3 概述
細胞免疫功能在機體防禦、自身穩定及免疫調節中起重要的作用,是機體免疫的一個重要的組成部分。細胞免疫檢驗,主要檢測細胞表面受體及其產生的淋巴因子,反映免疫活性細胞的數量與功能來判定機體的細胞免疫功能狀況,從而闡明某些疾病的發病機制,爲臨牀提供診斷治療的依據。目前的檢測項目有T細胞(T細胞亞羣)、K細胞、NK細胞、B細胞的數量和T淋巴細胞花環試驗、淋巴細胞轉化試驗和淋巴因子測定等。
8 白細胞移動抑制試驗的原理
致敏淋巴細胞在體外與相應抗原作用後能產生抑制多核白細胞移動的因子(leucocyte migration inhibitory factor,LIF),可以抑制白細胞移動。人體淋巴細胞產生的LIF也無種屬特異性,故可用人體白細胞或豚鼠白細胞作爲指示細胞進行LIF的檢測。
LIF的檢測分爲直接法和間接法兩種,一般認爲前者比後者敏感。直接法是將分離待測的受檢者白細胞與已知抗原在37℃溫育後,測定白細胞移動情況。間接法是將待測白細胞先與已知抗原在37℃溫育後,再取培養上清液與正常人白細胞或豚鼠白細胞作用,測定白細胞移動情況。兩種方法都是根據指示細胞移動受抑制的程度判斷機體有無相應的細胞免疫功能。
10 操作方法
(1)取肝素抗凝血3~5ml,用分層液分離白細胞,用Hank液洗兩次,計數後用細胞培養液配成8×107細胞/ml。
(2)將白細胞懸液分裝於毛細管中,方法同前。每3ml血可分裝8~10只毛細管。裝入各毛細管中的淋巴細胞液要求相等。用火焰將毛細管一端封閉,置水平離心機內離心1000r/min,10min。離心後細胞被壓緊呈4~6mm高,表層發自主要是白細胞,下層發紅爲紅白細胞混雜。在細胞與液體交界處鋸斷毛細管用少量凡士林將封閉端黏在培養小室底層,每個小室可放1~2只毛細管。
(3)每3~4只毛細管分爲一組,其中一組小室中加滿培養液,另一組或幾組小室中加滿含有一定濃度抗原的培養液(注意勿使毛細管和培養小室中留有氣泡)。小室用蓋玻片封閉,置水平位於37℃孵育24h,同上法測量毛細管中白細胞移動面積,試驗結果用移動指數(MI)表示。