2 英文參考
Determination of arsenic in urine by hydride generation atomic flurescence spectrometry
ICS 11.020
C 61
中華人民共和國衛生行業標準 WS/T 474—2015《尿中砷的測定 氫化物發生原子熒光法》(Determination of arsenic in urine by hydride generation atomic flurescence spectrometry)由中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會於2015年05月07日發佈,自2015年11月01日起實施。
3 前言
本標準按照GB/T 1.1—2009給出的規則起草。
本標準起草單位:中國醫科大學公共衛生學院、中國疾病預防控制中心地方病控制中心地氟病防治研究所、內蒙古自治區地方病防治研究中心。
本標準主要起草人:孫貴範、姜泓、劉霽新、李冰、高彥輝、夏雅娟、紀曉紅、王偉。
5 2 原理
尿樣用混合酸消化,以破壞有機物。在氫化物發生器中,尿樣中的砷化物被硼氫化鉀在酸性溶液(鹽酸)中產生的新生態氫還原成氣態的砷化氫,以氬氣作載氣,將砷化氫從母液中分離,並導入石英爐原子化器中原子化,以砷空心陰極燈作激發光源,使砷原子發出熒光,熒光強度與砷含量在一定範圍內成正比,據此可測定尿中砷含量。
6 3 儀器
3.4 電熱板,1000 W。
3.5 分析天平:感量0.01 g和0.0001 g。
3.6 尿比重計。
3.7 錐形燒瓶,100 mL。
3.8 容量瓶,10 mL、25 mL、1000 mL。
3.9 具塞刻度試管,20 mL。
7 4 試劑
注:除另有說明外,在分析中所使用試劑均爲優級純,實驗用純水符合GB/T 6682中二級水規格。
4.1 三氧化二砷(As2O3,M=197.84),爲劇毒試劑。
4.2 硝酸(HNO3),ρ20=1.42 g/mL。
4.3 硫酸(H2SO4),ρ20=1.84 g/mL。
4.4 高氯酸(HClO4),ρ20=1.75 g/mL。
4.5 鹽酸(HCl),ρ20=1.19 g/mL。
4.6 氫氧化鉀(KOH,M=56.1)。
4.7 硼氫化鉀(KBH4,M=53.9)。
4.8 氫氧化鈉(NaOH,M=40.0)。
4.9 硫脲(CH4N2S,M=76.12)。
4.10 抗壞血酸(C6H8O6,M=176.13)。
8 5 溶液配製
5.1 混合酸:分別取硝酸、硫酸和高氯酸按3:1:1體積混合。
5.3 氫氧化鉀溶液:稱取5g氫氧化鉀溶解後,加純水至1000 mL。
5.4 硼氫化鉀溶液:稱取15 g硼氫化鉀,溶解於1000 mL氫氧化鉀溶液中。
5.5 氫氧化鈉溶液:稱取40 g氫氧化鈉溶解後,加純水至1000 mL。
5.6 硫脲抗壞血酸溶液:稱取12.5 g硫脲,溶於約80 mL純水中,加熱溶解,冷卻後,加入12.5 g抗壞血酸,溶解後,加純水至100 mL;貯存於棕色瓶中,可保存一個月。
5.7 砷標準應用液:稱取經105℃乾燥2 h的三氧化二砷0.1320 g,加入10 mL氫氧化鈉溶液使之溶解,加5 mL鹽酸,轉入1000 mL容量瓶中,用純水定容至刻度,混勻。此溶液爲100.0μg/mL砷標準儲備液,置於冰箱內保存。臨用前,將此溶液逐級稀釋成濃度爲1.00μg/mL的砷標準應用液。或用國家認可的砷標準溶液配製。
9 6 尿樣的採集、運輸和保存
用聚乙烯塑料瓶收集尿液,混勻後,儘快測定相對密度。取25 mL尿液,放入50 mL聚乙烯塑料瓶中,可在室溫下(或放於4℃冰盒中保存)儘快運輸,於-18℃下保存。分析前需將尿樣復融後徹底搖勻。
10 7 分析步驟
10.1 7.1 樣品處理
取5 mL尿樣置於錐形燒瓶中,加入15 mL混合酸,置電熱板上,在較低溫度下加熱消化至冒白煙,溶液無色透明爲止,不得蒸乾。冷卻後,用純水定量轉移至25 mL容量瓶中,加純水至刻度,混勻。取出10mL置於另一具塞刻度試管中,加入2.0 mL硫脲抗壞血酸溶液,混勻,供測定。若樣品溶液砷含量超過測定範圍,可用純水稀釋後測定,計算時乘以稀釋倍數。
10.2 7.2 標準曲線的製備
取6個錐形燒瓶,按表1配製標準管。
表1 尿砷標準管的配製
管號 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
砷標準應用液/mL | 0 | 0.05 | 0.10 | 0.20 | 0.30 | 0.40 |
正常人混合尿/mL | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 |
砷的含量/μg | 0 | 0.05 | 0.10 | 0.20 | 0.30 | 0.40 |
參照附錄A儀器操作條件,將原子熒光光度計調節至最佳測定條件,分別測定標準系列,每個濃度重複進樣測定3次,以加入標準的砷含量爲橫座標,測得的峯高值減去零號管的峯高值後作爲縱座標,繪製標準曲線。
10.3 7.3 樣品測定
用測定標準系列的操作條件測定樣品和空白對照溶液。測得的樣品熒光強度減去空白對照熒光強度值後,由標準曲線迴歸方程法計算砷含量。在測定前後,以及每測定10個樣品後,測定一次質控樣品。
11 8 計算
8.1 按式(1)計算尿樣在標準相對密度(1.020)下的濃度校正係數(k)。
式中:
ρ——實測相對密度。
8.2 按式(2)計算尿中砷含量。
式中:
X——尿中砷的濃度,單位爲毫克每升(mg/L);
m——由標準曲線迴歸方程法計算出砷含量,單位爲微克(μg);
V——分析時所取尿樣體積,單位爲毫升(mL);V=10/25×5mL=2mL;
k——濃度校正係數(8.1)。