2 註解
Taq DNA聚合酶是從一種水生棲熱菌(Thermusaquaticus)yT1株分離提取的.yT是 一種嗜熱真菌，能在70～75℃生長.該菌是1969年從美國黃石國家森林公園火山溫泉中分離的。該酶基因全長2496個鹼基，編碼832個氨基酸，酶蛋白分子爲 94KDa.其比活性爲200000單位/mg.75～80℃時每個酶分子每秒鐘可延伸約150個核苷 酸，70℃延伸率大於60個核苷酸/秒，55℃時爲24個核苷酸/秒.溫度過高(90℃以上) 或過低(22℃)都可影響Taq DNA聚合酶的活性，該酶雖然在90℃以上幾乎無DNA合成， 但確有良好的熱穩定性，在PCR循環的高溫條件下仍能保持較高的活性.在92.5℃、95℃ 、97.5℃時，PCR混合物中的Taq DNA聚合酶分別經130min，40min和5～6min後，仍可 保持50%的活性，實驗表明.PCR反應時變性溫度爲95℃～20sec，50個循環後，Taq DNA聚合酶仍有65%的活性.Taq DNA聚合酶的熱穩定性是該酶用於PCR反應的前提條 件，也是PCR反應能迅速發展和廣泛應用的原因.Taq DNA聚合酶還具有逆轉錄活性， 其作用於類似逆轉錄酶.此活性溫度一般爲65～68℃，有Mn2存在時，其逆轉錄活性 更高.
TaqDNA聚合酶是Mg2依賴性酶，該酶的催化活性對Mg2 濃度非常敏感.以活性程度 很低的鮭魚精子DNA爲模板，dNTP的濃度爲0.7～0.8mmol/L時，用不同濃度Mg2 進行 PCR反應10min，測定結果爲Mgcl2濃度在2.0mmol/L時該酶催化活性最高，此濃度能最 大限度地激活TaqDNA聚合酶的活性，Mg2 過高就抑制酶活性，當Mgcl2濃度在 10mmol/L時可抑制40～50%的酶活性.由於Mg2 能與dNTP結合而影響PCR反應液中游離 的Mg2濃度，因而Mgcl2的濃度在不同的反應體系中應適當調整，優化濃度.一般反應 中Mg2 濃度至少應比dNTP總濃度高0.5～1.0mmol/L.適當濃度的KCL能使Taq DNA聚合 酶的催化活性提高50～60%，其最適濃度爲50mmol/L，高於75mmol/L時明顯抑制該酶 的活性.