1 拼音
GBZ/T 240.23—2011 huà xué pǐn dú lǐ xué píng jià chéng xù hé shì yàn fāng fǎ dì 23bù fēn ：chí fā xìng shén jīng dú xìng shì yàn
2 英文參考
Procedures and tests for toxicological evaluations of chemicals—Part 23:Delayed neurotoxicity test
ICS 13.100
C 52
中華人民共和國國家職業衛生標準 GBZ/T 240.23—2011《化學品毒理學評價程序和試驗方法第23部分：遲發性神經毒性試驗》（Procedures and tests for toxicological evaluations of chemicals—Part 23:Delayed neurotoxicity test）由中華人民共和國衛生部於2011年08月19日發佈，自2012年03月01日起實施。
3 前言
根據《中華人民共和國職業病防治法》制定本部分。GBZ/T 240《化學品毒理學評價程序和試驗方法》現分爲以下四十四部分：
——第1部分：總則；
——第2部分：急性經口毒性試驗；
——第3部分：急性經皮毒性試驗；
——第4部分：急性吸入毒性試驗；
——第5部分：急性眼刺激性/腐蝕性試驗；
——第7部分：皮膚致敏試驗；
——第8部分：鼠傷寒沙門氏菌回覆突變試驗；
——第13部分：哺乳動物精原細胞/初級精母細胞染色體畸變試驗；
——第15部分：亞急性經口毒性試驗；
——第16部分：亞急性經皮毒性試驗；
——第17部分：亞急性吸入毒性試驗；
——第18部分：亞慢性經口毒性試驗；
——第19部分：亞慢性經皮毒性試驗；
——第20部分：亞慢性吸入毒性試驗；
——第21部分：致畸試驗；
——第22部分：兩代繁殖毒性試驗；
——第24部分：慢性經口毒性試驗；
——第25部分：慢性經皮毒性試驗；
——第27部分：致癌試驗；
——第28部分：慢性毒性/致癌性聯合試驗；
——第29部分：毒物代謝動力學試驗；
——第33部分：果蠅伴性隱性致死試驗；
——第35部分：體外哺乳動物細胞程序外DNA合成（UDS）試驗；
——第42部分：一代繁殖試驗；
本部分爲GBZ/T 240的第23部分。
本部分由衛生部職業衛生標準專業委員會提出。
本部分由中華人民共和國衛生部批准。
本部分起草單位：山東省職業衛生與職業病防治研究院、中國疾病預防控制中心職業衛生與中毒控制所。
本部分主要起草人：陶玉珍、李斌、孫金秀、林錚。
4 1 範圍
GBZ/T 240的本部分規定了動物遲發性神經毒性試驗的目的、試驗概述、試驗方法、數據處理與結果評價、評價報告和結果解釋。
本部分適用於有機磷化合物的遲發性神經毒性測定。若某些受試樣品的化學結構式與遲發性神經毒性陽性物質相似，也需進行此項試驗。試驗分爲急性和亞急性遲發性神經毒性試驗。
5 2 規範性引用文件
下列文件對於本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用於本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用於本文件。
GBZ/T 224 職業衛生名詞術語
6 3 術語和定義
GBZ/T 240.1界定的術語和定義適用於本文件。
3.1
有機磷引起的遲發性神經毒性 organophosphorus induced delayed neurotoxicity，OPIDN
一種神經綜合徵，主要的臨牀症狀爲四肢無力、上位運動神經元損傷性痙攣，其相關的病理學症狀是周圍神經和脊髓遠端軸突病，生化作用是神經組織中的神經病靶酯酶（neuropathy target esterase，NTE）抑制和老化。暴露引起的NTE抑制和隨後的老化，其臨牀體徵和病理改變首先見於第1周～2周間。
3.2
神經病靶酯酶 neuropathy target esterase，NTE
又稱神經毒性酯酶（neurotoxic esterase）是膜結合蛋白，催化戊酸苯酯水解。該酶與有機磷共價結合發生磷酰化後，即被抑制或老化，與OPIDN之間有着密切關係。並不是所有抑制NTE的有機磷都能引起OPIDN，但是所有引起OPIDN的有機磷都能抑制NTE。
8 5 試驗概述
在急性遲發性神經毒性試驗中，高劑量採用最大耐受劑量，一次給藥後觀察21d。在亞急性神經毒
性試驗中，連續給藥28 d後，繼續觀察14 d。
試驗期間需對動物全面觀察，內容包括：行爲異常、運動失調、癱瘓等，試驗中定期進行生化檢驗，特別是NTE測定，並於試驗結束時進行神經組織的病理學檢查等。
9 6 試驗方法
9.1 6.1 急性遲發性神經毒性試驗
9.1.1 6.1.1 實驗動物
選用8個月～12個月健康成年母雞，無用藥史、無步態異常，體重1500 g～2000 g。受試樣品組和介質對照組每組至少12只，陽性對照組至少6只。試驗前置於試驗環境中觀察適應3d。
9.1.2 6.1.2 飼養條件
單籠飼養，飼養的籠子應足夠大，允許母雞自由行動，並可觀察其步態。如果是人工照明，應12 h照明，12 h黑暗，適當飲食，不限制飲水。
9.1.3 6.1.3 試驗分組
6.1.3.1 一般設3個～4個劑量組，每一劑量組動物要保證至少有6只動物用於生化指標檢驗，6只動物用於病理解剖。
6.1.3.2 先求出受試樣品對母雞的急性經口半數致死量（LD50）。
6.1.3.3 劑量範圍可在半數致死量和NOAEL之間設定，應包括人類實際接觸量及其100倍劑量。
6.1.3.4 當受試樣品劑量達每日1000 mg/kg體重，動物未出現毒性效應，更高的劑量則不予考慮，但當人的實際接觸劑量較大時，可考慮適當加大劑量。
6.1.3.5 介質對照組除不給受試樣品外，其他與受試樣品組完全一致。
6.1.3.6 陽性對照組要保證至少有6只母雞（3只用於生化檢驗，3只用於病理解剖）給予遲發性神經毒性陽性物，如三鄰甲苯磷酸酯（tri-o-cresylphosphate，TOCP），劑量爲500 mg/kg體重。也可採用近期的陽性對照數據。
9.1.4 6.1.4 試驗步驟
9.1.4.1 6.1.4.1 動物準備
試驗前動物隔夜禁食，但不限制飲水。
9.1.4.2 6.1.4.2 受試樣品的配製
受試樣品採用水溶液、混懸液或油溶液。灌胃量可根據各組不同劑量按5 mL/kg體重給予。如採用注射給藥，一般按1 mL/kg體重給予。
9.1.4.3 6.1.4.3 染毒
通常採用一次經口灌胃給藥，也可採用膠囊或母雞翅膀下注射給藥。
給予受試樣品前10 min～15 min應大腿肌肉注射硫酸阿托品作保護處理，用量爲10 mg/kg體重，以對抗急性副交感神經中毒症狀，同時肌肉注射解磷定25 mg/kg體重，以防止對膽鹼酯酶的不可逆抑制。
9.1.5 6.1.5 觀察指標
9.1.5.1 6.1.5.1 臨牀觀察
6.1.5.1.1 給予受試樣品後直到21 d每天至少觀察一次，記錄有無行爲異常，運動性共濟失調，癱瘓等症狀。在開始給予受試樣品的兩天應每天至少觀察3次～5次。
6.1.5.1.2 詳細記錄包括出現中毒症狀的時間、程度及持續時間。
6.1.5.1.3 每週至少兩次將母雞拿出籠子強迫活動，以觀察有無遲發性神經毒性的最小反應。
6.1.5.1.4 每週測體溫一次、稱體重一次、記錄食量一次。
6.1.5.1.6 共濟失調按以下5級進行記錄：
——0 無反應；
——A 腿軟、站立姿勢和步態稍異常；
——B 步態嚴重異常，行走時不斷跌倒；
——C 能勉強站立，但多以足站立；
——D 不能站立，通過扇動翅膀移動身體。
9.1.5.2 6.1.5.2 生化檢驗
給予受試樣品24 h、48 h後分別從各劑量組和介質對照組中隨機選擇3只母雞處死，陽性對照組隨機選擇3只母雞於24 h處死，取腦和腰脊髓進行NTE測定，如果觀察臨牀症狀出現緩慢，可適當延遲測定時間處死動物。必要時可測定這些樣品中的乙酰膽鹼酯酶（AChE）。所有解剖的動物應仔細觀察腦和脊髓的形態學改變情況。
9.1.5.3 6.1.5.3 病理組織學檢查
6.1.5.3.1 觀察期結束後將每組剩餘的母雞用空氣栓塞法或頸動脈放血法，迅速解剖取材，或用原位灌注固定法處死。
6.1.5.3.2 主要對腦、脊髓及遠端周圍神經組織進行病理組織學檢查：
——脊髓：包括頸段，胸段中部及腰骶結合部；
6.1.5.3.3 神經組織切片染色除常規蘇木精伊紅（HE）染色外，同時要進行髓鞘或軸索等特殊染色。
9.2 6.2 亞急性遲發性神經毒性試驗
9.2.1 6.2.1 動物
9.2.2 6.2.2 飼養條件
9.2.3 6.2.3 試驗分組
設3個劑量組和1個介質對照組。每組應有足夠的母雞數，保證至少有6只用做生化檢驗，6只於末次給藥後繼續觀察並於試驗結束時進行病理形態學觀察。
高劑量應引起明顯的毒性效應，但不能引起死亡或嚴重傷害。中劑量應出現極輕微中毒變化。低劑量不應出現任何毒作用。
如果1000 mg/kg體重未產生可觀察到的毒性作用，則不必進行更高劑量的測試。但當預期的人接觸量高於此劑量時則應加大劑量進行測試。
9.2.4 6.2.4 試驗步驟
9.2.4.1 6.2.4.1 受試樣品配製
首選灌胃或膠囊給藥。受試樣品採用水溶液、混懸液或油溶液。灌胃量可根據各組不同劑量按5 mL/kg體重給予。
9.2.4.2 6.2.4.2 染毒
每日一次經口給藥，每週7d，連續28 d，末次給藥後繼續觀察14 d。
9.2.5 6.2.5 觀察指標
9.2.5.1 6.2.5.1 臨牀指標
給藥期間和觀察期間每天至少觀察一次，記錄有無行爲異常，運動性共濟失調，癱瘓等症狀。具體觀察和記錄見6.1.5.1。
9.2.5.2 6.2.5.2 生化檢驗
觀察期間進行生化檢驗，分別於末次給藥後24 h和48 h各從每個受試樣品組和介質對照組隨機選擇3只母雞進行NTE和AChE測定。
9.2.5.3 6.2.5.3 病理組織學檢查
觀察期滿處死剩餘母雞，每組6只解剖取腦、脊髓及遠端周圍神經組織進行病理組織學檢查。見急性遲發性神經毒性試驗（見6.1.5.3）。
10 7 數據處理與結果評價
10.1 7.1 數據處理
將受試樣品組與陽性對照組、介質對照組做比較，進行統計分析，以確認是否有遲發性神經毒作用。
10.2 7.2 結果評價
7.2.1 評價內容包括臨牀神經毒性症狀、生化檢驗和病理檢查結果及可觀察到的其他毒性效應。對發生率、嚴重程度及相關性作出評價。
7.2.2 陽性對照組應出現共濟失調障礙，病理組織學證實有脫髓鞘改變，介質對照組無上述改變。
7.2.3 出現陽性時，需求得無作用劑量，進一步評價受試樣品與神經毒性的反應關係、發生率和嚴重程度。
7.2.4 評價要列出以下簡表，包括：
a）一般症狀變化，出現神經毒性症狀的類型、嚴重程度，計算出百分率、死亡率、體重變化、攝食量；
b） 食物利用率：（每週平均增加體重／每週平均進食量）×100%；