5-HT

1 概述

5-HT又稱血清素（serotonin），由色氨酸衍生，色氨酸經色氨酸羥化酶作用形成5-羥色氨酸，再經脫羧酶成爲5-HT。5-HT是中樞神經系統的傳遞物質，其活性部分是吲哚胺。它廣泛存在於腦、血小板、胃等組織中，以腦中的含量最大，是較強的平滑肌刺激和血管收縮劑。它在血小板中含量較高，血小板破裂釋放後參與血管收縮等效益。2/3的5-HT在肝臟與硫酸或葡萄糖醛酸結合後排出，或將吲哚斷裂而分解；約1/3經單氨氧化酶作用氧化脫氨形成5-HLAA後從尿排出。5-HIAA是5-羥色氨酸代謝的最終產物，不具有生物活性。

2 別名

5-HT；血清素

3 5-羥色胺的醫學檢查

3.1 檢查名稱

5-羥色胺

3.2 分類

激素類測定 > 腎上腺素測定

3.3 5-羥色胺的測定原理

由於一定量的組織中受體的數目是有限的，因此受體與配體的結合反應是可飽和的。若將不同濃度的放射性配體與受體膜製劑一起孵育，在反應達到平衡時，測定結合配基和遊離配體的量，前者爲放射性總結合量。同時在另一組相應各管內加入非標記的同一種配體以測定非專一結合量。總結合量與非專一結合量之差，即爲特異性結合量。受體特異性結合量顯示受體膜製劑的有限結合能力。當放射性配體（³H-5-HT）達到某一濃度時，最高結合值趨於恆定。即受體與配體的結合量開始隨放射性配體濃度增加而增加，當放射性配體達到一定濃度時，受體與配體的結合達到飽和，利用此原理，本實驗測定5-羥色胺（5-HT）受體配體和大腦受體的結合容量（RT）及受體和配體結合的能力，用平衡解離常數Kd表示。它們的反應式如下：

式中R：受體，

L：配體；

V₁：複合物RL形成速率；

V₂：複合物的解離速率；

K₁和K₂：相應的速率常數，根據質量作用定律。

若[]表示濃度，則

V₁＝K₁[R][L]

V₂＝K₂[RL]

當反應達到平衡時，V₁＝V₂，即K₁[R][L]＝K₂[RL]，若以Kd代表K₂/K₁，則Kd的單位是濃度單位（mol/L），Kd越小表示親和力越大。

3.4 試劑

（1）儀器：液體閃爍計數器、超速離心機、低速冷凍離心機、高速分散勻漿器、超聲波粉碎儀、磁力攪拌器、恆溫水浴箱（37℃）、微量加樣器、69型玻璃纖維濾紙或GF/B瓦特曼玻璃纖維濾紙、多頭細胞收集器、手術器械。

（2）化學試劑：Tris，AR，鹽酸、AR，抗壞血酸、AR，優降寧（pargyline）AR，³H-5HT、6×10¹²Bq/mmol、濃度3.7×10⁷Bq/ml、放化純度＞97%，PPO，POPOP、二甲苯、AR，5-羥色胺肌酐硫酸鹽。

（3）溶液配製

①50mmol/L Tris-HCl pH7.7。

②50mmol/L，Tris-HCl溶液，含0.1%抗壞血酸和10μmol優降寧，調pH至7.2。

③10μmol/L 5-HT溶液，用溶液②溶解5-羥色胺肌酐硫酸鹽，使濃度爲10μmol，暗處保存備用，因在日光下極易氧化，所以要現配現用。

④放射性配體的配製：本實驗使用3H-5HT作爲5-羥色胺受體的放射性配體。比活度爲6×10¹²Bq/mmol/L，濃度爲3.7×10⁷Bq/ml。即³H-5HT599Bq/pmol，或3.7×10⁴Bq/1μl。要求配製3H-5HT的化學濃度爲242pmol/ml，根據上述要求，用微量加樣器精確地吸取³H-5HT 3.92μl置於小瓶中，用氮氣吹乾，加入1ml溶液②搖勻備用。取20.66μl滴於濾紙上，80℃烘乾1h，置於閃爍杯中，加入4ml閃爍液測量放射性，設儀器測量效率爲44%，則應測得的計數爲79121cpm/5pmol3H-5-HT。放冰浴中備用。

⑤0.4%PPO，0.02%POPOP二甲苯閃爍液。

3.5 操作方法

（1）膜受體製備：

①腦勻漿：大鼠或小鼠斷頭放血，將頭剪下置冰浴中，並用骨剪剪開頭顱立即取出大腦，除去包膜及殘血，剪碎後加入相當重量20倍體積的預冷的溶液①，用內切式高速分散器勻漿10000r/min，1min，再用超聲波粉碎器勻漿60s。全部過程在冰浴中進行。

②離心：腦勻漿在1000×g離心10min，除去細胞核及緻密物質，用滴管小心地將上清液移至另一離心管中，再用50000×g離心10min，棄去上清液，沉澱物再用溶液①洗滌離心2次。最後所得的沉澱物爲含受體的細胞膜碎片。全部操作都在0～4℃進行。

③懸液：沉澱物用溶液②懸浮，再用超聲波粉碎器勻漿60s。然後用溶液②配成每毫升懸浮液中含腦組織溼重11.76mg。取0.2ml按lowry法測定其蛋白含量。放冰浴中備用。

（2）結合反應 反應總體積爲2ml，試管分二部分，一部分爲總結合反應管，另一部分非特異性結合反應管。

①總結合試驗：按表1順序逐項加試劑。

②非特異結合（NSB）試驗：本實驗以10^－5mol/L的5-HT所抑制的結合配體爲非特異性結合。用溶液②配製200nmol/L 5-HT溶液備用。按表2順序逐項加試劑。

③溫育：最後一項試劑膜受體加入後立即在混旋器上混勻，然後將管子置於恆溫水浴中37℃溫育10min，不停地振播，使結合反應達到平衡。

④結合配基和遊離配基的分離溫育結束後立即將反應管置於冰浴中終止反應。A.用兩層69型玻璃纖維濾紙或GF/B玻璃纖維濾紙，以多頭細胞收集器進行減壓過濾，用冷的溶液①洗去未與受體結合的遊離的放射性配基，可一次抽濾10管，每管用5ml溶液①洗3次，分離時間要在20s完成。分離完畢後，將濾紙置於盤內，80℃烘箱烘乾1h。B.如果無多頭細胞收集器，可用負壓玻璃瓶逐管抽濾。這樣一次不能做太多管子，因爲分離時間極短。做完一批之後再做第二批。

⑤測量：將烘乾的濾膜按順序置於閃爍杯內，並加4ml閃爍液，用液體閃爍計數器測量其放射性。所得計數即爲總結合配基的量。

（3）結果計算：反應體積是2ml，其中含有20mg溼重的腦組織。本實驗室液體閃爍計數器測量濾紙的效率是44%。數據處理目的是計算受體與放射性配基的結合總量（R_T）以及它們的Kd常數。常用的方法有Scatchard法和Hill係數法。

Scatchard作圖法：

A.總結合管每管加入的³H-5-HT量，測得的cpm數（復管）。一般加入的³H-5-HT被受體結合的總量小於3%，即加入的³H-5-HT總量（LT）＞＞³H-5HT結合量（B），因爲F＝L_T－B，所以F≈L_T。

B.計算非特異性結合量（NSB）：爲了減少NSB的誤差對特異結合的影響，我們先將實驗得到的數據進行直線迴歸，然後根據方程求相應於每個總結合管的NSB期望值。這樣處理後可明顯減少NSB數據波動對實驗結果的影響。

C.計算特異性結合（B）：

B＝總結合（cpm）－NSB（cpm）

D.求遊離配基量（F）：加入³H-5HT總量（LT）＞＞³H-5-HT結合量（B），

∵F＝L_T－B ∴F≈L_T。

E.求B/F：

將上述各項計算綜合如表3。

以B/F爲縱軸，B（pmol）爲橫座標作Scatehard圖。

在計算器上將上表中的B（pmol/g）值輸入X，B/F值輸入Y，求得直線迴歸結果是：Y＝－1.145X＋29.1，r＝－0.99，Kd＝8.72nmol/L、BT＝25.4pmol/g組織（腦）。

Hill作圖：Hill作圖的數據列於表4中。

表4中第一、二欄爲³H-5-HT加入量及其對數。第三欄取自Scatehard作圖數據，Bmax＝25.4pmol/g組織。第四、五欄爲結合率及其對數，根據這些數據以log[³H-5-HT]爲X軸，爲Y軸繪Hill圖。經直線迴歸斜率＝0.94，Hill係數h_H＝1.0。kd＝9.3nmol/L。這與Scatehard分析得到的kd＝8.73沒有顯著差異。

3.6 正常值

血清0.22～2.06μmol/L （39～361ng/ml）

3.7 化驗結果臨牀意義

（1）升高：類癌瘤綜合瘤綜合徵、術後傾倒綜合徵、偏頭痛、低氧症等。

（2）降低：系統性紅斑狼瘡（SLE）、類風溼性關節炎（風溼性關節炎）、混合性結締組織病等結締組織疾病、帕金森病（震顫性麻痹）、舞蹈病、肝豆狀核變性（Wilson病）、精神分裂症、神經衰弱等。

3.8 附註

食入大量的核桃、香蕉後也可上升。

3.9 相關疾病

傾倒綜合徵、偏頭痛、頭痛、系統性紅斑狼瘡、紅斑狼瘡、類風溼性關節炎、混合性結締組織病、帕金森病、肝豆狀核變性、精神分裂症、神經衰弱