3 註解
逆轉錄聚合酶鏈反應(Reverse transcription PCR;RT-PCR)是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA爲模板,擴增合成目的片段。RT-PCR技術靈敏而且用途廣泛,可用於檢測細胞中基因表達水平,細胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作爲模板的RNA可以是總RNA、mRNA或體外轉錄的RNA產物。無論使用何種RNA,關鍵是確保RNA中無RNA酶和基因組DNA的污染。用於反轉錄的引物可視實驗的具體情況選擇隨機引物、Oligo dT 及基因特異性引物中的一種。對於短的不具有髮卡結構的真核細胞mRNA,三種都可。